DB37_T 2121-2012尿素中多肽含量的测定.pdf

ICS 65. 080G 20DB37山長东省地方标准DB37/T2121—2012尿素中多肽含量的测定2012-05-07发布2012-06-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 2121—2012前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省化工行业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：山东省化工研究院、中化山东肥业有限公司本标准主要起草人：崔爱红、王瑞菲、李琳、祈新宇、于用玲、刘丙勇、饶飞、邱娟。I DB37/T 2121—2012尿素中多肽含量的测定1范围本标准规定了尿素中多肽含量高效液相色谱测定的试验方法。本标准适用于尿素中多肽含量的测定。本标准的检出限为3μg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法HG/T 2843化肥产品化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液3方法原理将尿素中的多肽（聚天门冬氨酸）水解成天门冬氨酸，在碱性条件下，天门冬氨酸与异硫氰酸苯酯反应，采用反相液相色谱法进行多肽含量（以天门冬氨酸计）的测定，外标法定量，+仪器设备仪器设备包括：a)高效液相色谱仪：带紫外检测器：b)超声波清洗器：c)压力蒸汽器：额定压力为0.14Mpa：d)恒温水浴锅：e)旋转蒸发仪：f)分析天平：感量0.0001g：g)水解管：50mL；h)针头过滤器：带0.45μm有机相过滤膜，5试剂和溶液5.1本标准所用试剂在没有注明其他要求时，均使用分析纯试剂：色谱流动相的配制使用GB/T6682规定的一级水，其他使用三级水。5.2试验中所用制剂及制品、试剂溶液在没有注明其他要求时，均按HG/T2843的规定制备。5.3试剂和溶液主要包括：a）甲醇：色谱纯：1 DB37/T 2121—2012b)三乙胺：c) 正已烷;d) 盐酸：e) 异硫氰酸苯酯-甲醇溶液：移取1.2mL异硫氰酸苯酯，溶于100mL甲醇中，此溶液室温下可保存一周：f)盐酸溶液：c(HC1）=0.1 mo1/L:g)氨水溶液：1+4；h)乙酸铵溶液：c（CH3C00NH,）=0.05mo1/L，pH=6.0~6.5。称取1.93g乙酸铵加入500mL水溶解，用氨水溶液调节pH为6.06.5，经0.45μm滤膜过滤，于超声波清洗器中超声脱气30 min;i)苯酚：称取100g苯酚于250mL蒸馏烧瓶中，连接施转蒸发仪，调节真空度约为0.5MPa，加热蒸馏，收集馏出的苯酚，现用现蒸，j)天门冬氨酸标准储备液（1.0mg/mL）：称取天门冬氨酸0.1g（精确到0.0002g）于50ml烧杯中，加盐酸溶液溶解，转移至100L容量瓶中，用盐酸溶液（定容至刻度，此标准储备液于4℃下可保存两周k)天门冬氨酸标准工作溶液（100μg/mL）：移取5.00mL天门冬氨酸标准储备液，置于50 ml容量瓶中，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，现用现配。6分析步薪6.1天门冬氨酸标准系列的制备按表1所示，分别移取0.00mL，0.10mL，0.20mL，0.40mL，0.60mL，0.80ml天门冬氨酸标准工作溶液置于6个10mL具塞试管中，加盐酸溶液至1.00mL，加入1mL三乙胺、1.5mL异硫鼠酸苯酯甲醇溶液，加甲醇至5mL，置于50℃水浴中加热反应1h。冷却至室温，加入3mL正已烷，振摇2min，静置10min后弃去上层溶液，再加入3mL正已烷，振摇2min，静置10min后弃去上层溶液，用注射器取下层溶液1mL，用针头过滤器过滤，备用。表1天门冬氨酸标准系列天门冬氨酸标准溶液体积，mL对密的天门冬氨酸质量，喝0. 00°00. 10100. 20200. 40400. 60600. 8080·试剂空白溶液6.2试验溶液的制备称取试样2g~～3g[准确至0.0002g，以含多肽（以天门冬氨酸计）1g～2mg为宜)，置于水解管中，加入20mL盐酸，0.3g苯酚，放入压力蒸汽器内，待到额定压力时开始计时，水解1.5h.冷却后将试液转移至蒸发皿中，于沸水溶上蒸干。沿蒸发Ⅲ壁加入10mL盐酸溶液，于沸水浴上拌至固体全2 DB37/T 2121—2012部溶解后，将试液转移至25叫L容量瓶中，冷却至室温后用盐酸溶液定容至刻度，摇勾备用。此为试验溶液A移取试验溶液A1.00mL于10ml具塞试管中，加入1mL三乙胺、1.5nL异硫氰酸苯酯-甲醇溶液，加甲醇至5ml，置于50℃水浴中加热反应1h。冷却至室温，如入3mL正已烷，振摇2min，静置10min后弃去上层落液，再加入3m正已烷，振摇2min，静置10min后弃去上层溶液，用注射器取下层落液1mL，用针