尿液，静脉血清和血浆代谢组的不稳定性.pdfVIP

A A 附 录 A （资料性） 代谢组的不稳定性 A.1 通则 据文献可知，离体生物体液的代谢组稳定性有两个主要的关键方面： a) 由于细胞的存在而引起的采集后改变，主要与酶促反应有关。 b) 在小分子和溶解氧的复杂混合物中发生的化学反应，导致采集后的改变。 在这里，我们提供了观察到的尿液和血清/血浆中组分改变的示例，这些示例可以用作评估内部程 序的工具。 A.2 尿液 a) 由于细胞的存在而引起的采集后变化。 收集了三个具有不同细胞含量的尿样 （1-非常高；2-中；3低），分成2个等分试样品，其中一个 （标记为R）正常进行分析，将另一个 （标记为P）则在分析之前进行温和离心。细胞含量可通过 对P样品进行温和预离心后的沉淀物进行目测来估算。 通过获取样品在采集后不同时间点 （0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时）的NMR谱图 （600MHz，300K下的HNOESY实验），监测P和R尿液中代谢组随时间的稳定性，最长时间点为20至1 24小时，用过夜（ON，overnight）表示（见图A.1）。在两次核磁谱采集之间的时间段，样品需保存在4℃。 与原始代谢组的偏差是通过每个时间点获得的谱图与0时间点的谱图之间的欧几里得距离进行评估。 两个光谱之间的欧几里得距离被计算为n维空间中的距离，其中n对应于每个谱图的点数。 标引序号说明 t：时间，以小时(h)为单位 dE: 欧几里得距离 注：红箭头表示0时间点 9 图A.1 不同细胞含量的样品代谢谱随时间的偏差 样品3的曲线在P和R尿液中都非常稳定。相反，样品2-R和1-R的轮廓与P对应的轮廓随着时间的推 移逐渐变得不稳定。这些数据表明，使用温和的离心和/或过滤去除新鲜尿液中的细胞可确保样品的一 致性和稳定性。该处理步骤的重要性取决于每个样品中的细胞含量，每个患者的细胞含量都不同。细胞 数越高，观察到的变化程度越大。应避免在去除细胞之前冻结，以防止细胞破裂和释放细胞内内容物。 b) 样品采集后由于化学反应而发生的变化。 跟踪预处理后尿液中代谢组的稳定性24小时，每2小时获取一次NMR谱图。 在两次数据采集之间 时间段，样品需在4℃保存。在预处理 （0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时）之后的不同时 间点以600MHz，300K记录HNOESY实验，最长时间点为20至24小时，以过夜 （ON，overnight）表示。1 标引序号说明 蓝线：t=0h 绿线：t=1h 红线：t ＝2h 橙线：t ＝4h 暗红线：t=6h 紫线：t=8h 青线：t=ON （过夜） a 琥珀酸盐 b 丙酮酸盐 c 醋酸盐 d 抗坏血酸盐 e 肌酸 δ ：质子化学位移，以Hz/MHz为单位 （此处以Hz/MHz表示的化学位移，通常称为ppm。） 1H 注：箭头指示随时间变化的方向。 图A.2 尿液样品中与处理阶段无关的影响 10 去除细胞后，代