DB37_T 3422-2018混合型饲料添加剂中硫酸粘杆菌素的测定高效液相色谱法.pdf

ICS65.120B46DB37山長东省地方标准DB37/T3422—2018混合型饲料添加剂中硫酸粘杆菌素的测定高效液相色谱法Determination of colistin sulfate in mixed feed additives - High performance liquidchromatography2018-09-14发布2018-10-14实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 3422—2018前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧善医局提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东省饲料质量检验所。本标准主要起草人：张玮、宫玲玲、李会荣、张芸、孙延军、李俊玲。I DB37/T 3422——2018混合型饲料添加剂中硫酸粘杆菌素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了混合型饲料添加剂中硫酸粘杆菌素含量测定的高效液相色谱法本标准适用于混合型饲料添加剂（以饲料原料霜壳粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、小麦粉以及多种饲料原料混合物（包括箱壳粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、玉米芯粉、小麦粉、桔梗、甘草、白术、赤药、知母、伏零等混合）为载体）中硫酸粘杆菌素的测定。本标准的检出限：硫酸粘杆菌素A为1.0mg/kg，硫酸粘杆菌素B为0.74mg/kg：定量限：硫酸粘杆菌素A为2.0ng/kg，硫酸粘杆菌素B为1.49mg/kg规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 66822分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中硫酸粘杆菌素用5%草酸落液提取，经固相率取柱净化，丹硕酰氯衍生，高效液相色谱-灾光检测法测定，外标法定量。4试剂或材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水。4. 1甲醇：色谱纯。4.2硫酸粘杆菌素标准品：CAS：1264-72-8。硫酸粘杆菌素A含量≥44.6%，硫酸粘杆菌素B含量≥33. 2 %4.35%草酸溶液：准确称取50g草酸，用水溶解至1000mL。4.40.2%乙酸溶液：准确吸取2mL冰乙酸，用水稀释至1000mL4.50.2%甲酸水落液：准确吸取2mL甲酸，用水稀释至1000mL4.6盐酸落液：盐酸+水=9+100，V+V4.7乙睛甲酸水溶液：乙睛（色谱纯)+0.2%甲酸水溶液(4.4)=2+8，V+V。4.8丹磺酰氯溶液（3.0mg/mL）：快速称取0.30g丹磺酰氯（色谱纯）于100mL棕色容量瓶中，用乙睛(色谱纯)溶解并定容，现用现配。注：丹磺酰氯对光和湿敏感不稳定。1 DB37/T 3422—20184.9碳酸钠缓冲落液（pH=10.5）：c（Na;C0,）=0.1mo1/L，准确称取1.06g碳酸钠，加水80ml溶解，用盐酸溶液（4.6）调节pH至10.5，用水定容至100ml。4. 10盐酸甲胺溶液（20mg/mL)：称取2.0g盐酸甲胺，用水溶解并定容至100mlL2C8℃保存.4.11硫酸粘杆菌素标准贮备溶液：精密称取硫酸粘杆菌素标准品（4.2）适量（精确至0.01g），置于10mlL容量瓶中，用乙睛甲酸水溶液（4.7）定容，配成浓度为硫酸粘杆菌素A为1.0mg/mL、B为0.74g/mL。（因标准品含量不同而不同）的标准贮备溶液。2℃C8℃保存，有效期为6个月。4. 12硫酸粘杆菌素标准中间溶液：准确移取硫酸粘杆菌素标准贮备溶液（4.11）1.0mL置于10mL容量瓶中，用乙腈甲酸水溶液（4.7）定容至刻度。该溶液中硫酸粘杆菌素A的浓度为100μg/nL、B浓度为74.4μg/mL。2℃～8℃保存，有效期为3个月。4. 13硫酸粘杆菌素标准工作落液系列：准确移取硫酸粘杆菌素标准中间溶液（4.12）适量，用乙睛甲4.00μg/mL、20.0μg/mL和40.0μg/mL；硫酸粘杆菌素B浓度分别为0.0744μg/mlL、0.149μg/mL、0.298μg/mL、1.49μg/ml、2.98μg/mL、14.9μg/mL、29.8μg/ml.的标准工作溶液系列。现用现配。4.14固相萃取柱：亲水亲脂平衡小柱60mg/3mL，或其它性能类似的小柱。4. 15微孔滤膜：0.22μm，有机系。仪器设备5. 1高效液相色谱仪：配有灾光检测器5. 2分析天平：感量为0.001g和感量为0.01g各1台。5. 3恒温水浴锅：精度为1℃：5. 4离心机：转速不低于8000r/min。5.5pH计：精度为0.015.6多管涡旋振荡器。5. 7固相率取装置。5.8↓旋涡混合器。6样品按