NY_T 3642-2020CN桃品种鉴定 SSR分子标记法.pdf

ICS 65.020.01B 05NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3642—2020桃品种鉴定SSR分子标记法Identification of peach cultivars using SSR markers method2020-07-27发布2020-11-01实施中华人民共和国农业农村部3发布 NY/T 3642—2020附录B(规范性附录)溶液配制B. 11 mol/L Tris 溶液称取121.91gTris，溶解在800mL去离子水中，待溶液冷却至室温后加人浓盐酸调节pH至8.00。加水定容至1L，分装后高压灭菌备用。B.20.5mol/L EDTA溶液称取186.10g二水EDTA，加人到800mL去离子水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用氢氧化钠调节游液的pH至8.00，然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。B.32%CTAB抽提缓冲溶液称取CTAB4.00g、氧化钠16.36g量取1mol/LTris游液20mL和0.5mol/LEDTA游液8mL，先用70mL双蒸水溶解，再定容至200mL高压灭菌备用。B.43mol/L醋酸钠溶液称取40.81g三水酷酸钠，加人到80mL去离子水中溶解，用冰乙酸调节pH至7.00，加水定容到100mL.分装后高压灭菌备用。B.550×TAE缓冲液的配制称取Tris242g和EDTA18.61g于1L烧杯中，加人约800mL去离子水，充分搅拌均匀，加人57.10mL的冰乙酸，充分解，用氢氯化钠调pH至8.30，加去离子水定容至1L后，室温保存。使用时稀释50倍，B.61%琼脂糖凝胶的配制称取4g琼脂糖，加人40mL1×TAE缓冲液，加热溶解后迅速倒人制胶模中，待胶凝围后使用。B.710×LoadingBuffer缓冲液称取EDTA7.33g澳酚蓝1.25g、二甲苯青1.25g，加入500mL烧杯中，加人约200mL去离子水，加热搅拌至充分溶解，加人180mL甘油，使用2mol/L氢氧化钠调节pH=7.00，用去离子水定容至500mL，常温保存各用。B.8SSR引物溶液合成的引物离心管开盖前解时离心10s，按照说明书分别配制上游引物和下游引物终浓度均为10μmol/L，正反向引物等量混合，备用，B.930%丙烯酰胺溶液(W/V)分别称取290g丙烯酰胺和10g甲叉双丙烯酰胺溶于约800mL水中，加水定容至1000mL，置于棕色瓶中4℃储存。B. 106%变性PAGE胶(W/V)甲基乙二胺，加水定容至60mL。B. 11亲和硅烷工作液吸取1mL无水乙醇，加人10μL亲和硅烷和10μL冰酷酸，混匀。B. 12离硅烷工作液量取2mL的二甲基二氟硅烷，加8mL的三氧甲烷，混匀。 NY/T 3642—2020B. 1310%过硫酸铵溶液(W/V)称取0.10g过硫酸铵溶于1mL水中。B. 1410XTBE缓冲液溶液(0.50mol/L)，加水定容至1L。B. 155×TBE缓冲液量取500mL的10×TBE缓冲液，加水定容至1L，B. 161×TBE缓冲液量取500mL的10×TBE缓冲液.加水定容至5L，B.17圈定液量取100mL冰醋酸，加水定容至1L，B. 18染色液称取1g硝酸银，游于1L水中，B. 19显影液称取10g氢氧化钠溶于1L水中.用前加2mL甲醛。 NY/T 3642—2020附录C(规范性附录）核心引物名单及序列荧光引物(上游或下游进行5FAM、HEX和TAMRA标记)的染色体位置及PCR信息见表C.1，表 C. 1核心引物名单及序列引物名称在桃基因组V2.0al服本的位置，bp重复单元引物序列(5-3)退火温度，匕SSR73Chr. 4,29 833 093~29 833 110(CAA),F: TTGCTGCTGAAAAATAATGAACAR, GGGTGGCCTGTTGAGAATATAA56SSR93Chr. 8; 16 601 301~16 601 397(AG),F: AACTGCCTTAGCTTAGACTGGCTR: AAGACGAGAAACCACCTTGAATC56SSR96Chr. 2; 25 847 748~25 847 813(AG),F, AACCTCAATCATTCTTTACACAAGCR: CTGCTTAAGGAGGAACCTCAAAT56SSR107Chr. 2: 18 644 503-18 644 518(GA),F, TGCAGACTAGGGTTTTACAGACAAR; GATCTCCAAGTCATCTCCATCTG56SSR125Chr. 6; 22 369 258~22 369 335(GA),F; TAGCGCCATTGTTCACACACR, GCTGGGAGAGAAAGATGACTGT56SSR152Chr.