DB23-T1017-2005乳及乳制品中坂崎肠杆菌的检验.pdf

ICS 07. 100. 30C 53DB23备案号：黑龙江省．地電方标准DB23/T*8*7---2005乳及乳制品中坂崎肠杆菌的检验(送审稿)双-求-发布XX实施黑龙江省质量技术监督局发布 DB××/T ×××××××xI本标准丁.年月首次发布。标准的附录A是资料性附录、·附录B是规范性附录。本标准由黑龙汇省卫生厅提山。本标准起草单位：黑龙江省公共卫生监测检验中心。小标雅王要起草人：万丽葵、遇晓杰、张剑峰。 DBx×/T ××××X××x浮及乳制品中坂崎肠杆菌的检验范围本标推规定了乳j乳制品中坂崎肠杆菌（Enterobactersakazakii）的检验方法。本标准适用丁乳与乳制品中坂崎肠杆菌的检验。2规范性引用文件下列文仆中的条款避过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文仆，其随后所有的修收单（不包括勘误的内窄）或修订版均不适用丁本标准，然而，鼓励根据本标达成协议的各方研究是可使则这些文仆的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用丁本标准。GB/T4789.28一2003食品.卫生微生物学检验染色法、培养基利试剂3术语、定义下列术语和定义适用丁本标雅。坂崎肠杆菌崎肠秤菌为毕兰氏染色阴性无芽胞杆菌，周鞭毛，需氧、兼性厌氧，有动力。是肠杆菌科、肠朴荫属的！个种。能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖等，不发酵D-山梨醇，产生α一葡萄糖酶，氧化酶阴性。4设备和材料a）循环水浴箱：45.5℃土0.2℃，管子浸没在水中，水面必须高丁管子中培养基的高度；h）恒温培养箱：0℃～50℃：c）紫外分析仪：360nm;(）均质器或乳钵：e）高压灭菌器：）大平：0g～2000g，感革0.1g;g）带放人镜的菌落计数器；显微镜：10×～100×;i）培养血：百径90 mm;j）吸管：1mL（具0.01mL 刻度）、5mL和10mL（具0.1mL刻度）；k）锥形瓶：2L、500ml、250mL、125mL:1）接种针、3mm接种环、涂布坡璃棒；m）载坡片、盖坡片：n）精密 PH 试纸。5培养基和试剂a）肠道菌增菌肉汤（EE）：参咒附录A.1;h）肠道菌计数琼脂（VRBGA）：参见附录A.2）营养琼脂：按GB/F4789.28—2003中4.规定：d）膜蛋白陈人豆琼指（TSA）：参见附录A.3；e）OK琼脂：参见附录A.4;f）DFI琼脂：参见附录A.5: DB××/T ××××-g）AP『20F生化试剂条：h）氧化酶：按GB3/T4789.28—2003中3.18规定；i）氏染液：按GB/T4789.28—200342.2规定；j）灭菌蒸馏水。6检验程序坂崎肠科菌检验程序见图1。检前增菌：称样100g（mL），10g（ml.），1g（mL），分别接种有900mL、90mL、9mL预热至45℃的灭菌蒸馏水中36℃±1℃，过夜缔养增菌：移取10ml+90mLEE肉汤混勾36℃±1℃，孵育过夜选择性培养：涂布法或剐线法接种VRBG（OK、DFI）36℃±1℃，培养24h挑取可疑菌落划线接种TSA25℃±1℃，培养 48h~-72h挑取黄色菌落筑化酶试验生化鉴定（常姚生化试验或API20E）报告图17操作步骤7.1取样7.1.1，液体样品：反转样品数次，以使样品均勾，但应避免形成泡沫，以无菌操作取样。7.1.2粉状样品：反转样品包装数次，以使样品均勺，以无菌操作打开包装取样。若样品装的过满，测应将其置入较人的灭菌容器中混勾。7.1.3固体样品：以无菌操作，随机抽取有代表性的样品，充分剪碎并搅拌均匀后取样。2 DBxx/T ×Xxx-XXXX7.2制样及增菌以无操作，一式三份称（量）取混勺后的试样100g（mL）、10g（mL）、1g（mL），分别接种丁装有900mlL、90ml、9mL预热至45℃灭菌蒸馏水的三角瓶中。充分振摇使其溶解。36℃土1℃过夜培养后，分别移取1:述培养液10mL转种至装有90mLEE肉汤的三角瓶中，36℃±1℃过夜培养。7.3分离7.3.1充分混合每个瓶中的溶液，采用百接涂布或百接划线方法进行分离培养。卓接涂布法：每--增菌培养物取0.2ml加到2个VRBG（OK、DFI）平板的表面，每个VRBG（OK、DFI）}板各加0.1ml，用无菌玻璃棒涂布（如果估计检样有很高的坂崎肠杆菌数革，测增菌培养物须用无菌的肉汤稀释至10‘～10后涂布）。接划线法：每--增菌培养物用 3mm的灭菌接种环（10μL）分别划2个VRBG（OK、DFI）平板。7.3.2将_上述平板置36℃土1℃培养24h，观察菌落形态。坂崎肠杆菌在VRBG平板上菌落为紫色的菌落周阐伴随着紫色的胆汁酸沉淀晕环：OK平板上菌落为无色带有炭光：DFI显色平上菌落为蓝绿色菌落。7.4.白鉴别平板上百接挑取5个以_上坂崎肠杆菌可疑菌落，不足5个按实际数挑取，分别