NY_T 3875-2021CN驴骡马源性成分鉴定 实时荧光定性PCR法.pdf

ICS 65.020.30CCS B 43NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3875—2021驴骤马源性成分鉴定实时荧光定性PCR法Identification of donkey,mule/hinny and horse derived materials-Real-time qualitative PCR method2021-05-07发布2021-11-01实施中华人民共和国农业农村部发布 →+ NY/T华人民共和国农业行业标准驴骤马源性成分鉴定实时荧光定性PCR法NY/T 3875—2021中国农业山版社山版（北京市朝阳区麦子店街18号楼）(政编明：100125网址: www, ccap. toE. cn)北京印端厂印制新华书店北京发行所发行各地新华书店经销4开本 880mmX1230mm 1/16卵张 0, 75字数 15 干2021年10月第1版2021年10月北京第1次印的)书号; 16109 · 8583定价：24.00元版权专有侵权必究NY/T报电话：（010 NY/T本文件按照GB/T1.1—2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草，本文件由农业农村部畜牧兽医局提出，本文件由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口。本文件起草单位：山东省农业科学院生物技术研究中心。本文件主要起草人：张全芳、胡悦、范阳阳、刘艳艳、谭晴晴、杨雪、陈雪燕、刘国霞、陈淑娟、谷玉霞、杨连群、王俊燕、步迅。I NY/T骤马源性成分鉴定实时荧光定性PCR法1范田本义件规定了驴，翼和马3种动物源性成分的实时荧光定性PCR检测方法本文件适用于动物内、皮、毛中驴、疆和马3种动物源性成分的定性检测。本方法定性检出限为1%。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性用面构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 66822分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质盐控制规他食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1实时荧光PCRreal-time PCR在聚合酶链式反应(PCR)的体系中加人荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个PCR进程，对未知模板进行定性或定量分析。3. 2循环数阅值cycle threshold,C每个反应等内的荧光信号达到设定的阔值时所经历的循环数3. 3肌肉肌酸激酶基因creatine kinase of muscle gene,ckm码肌内肌股激酶的一个核基因。4原理根据学和马的核基因m设计马属通用引物.在差异位点处分别设计驴和高的特异性TqMun探针，采用实时荧光PCR技术进行扩增，根据PR扩增反应的荧光信号及循环阅值.判定试样中含有驴，弱和马3种动物源性成分的情况。5试剂或材料除非另有规定·仅使用分析纯试剂。5.1 水;GB/T 6682,—级水。5.2Tris-HCI缓冲液(1 mol/L.pH 6.4);称取 12.10 g Tris置于100 ml.烧杯中,加入 80 mL水,用盐调节pH至6.4.加水定容至100mI..103.4kPa蒸汽压（121C)灭菌20min，室温保存待用5.3Tris-HCI缓冲液(0. 5 mol/LpH 8. 0)：称取 6. 05 g Tris 置于 100 ml.烧杯中,加人80 ml.水,用盐酸调节pH至8.0.加水定窄至100mL，103.4kPa蒸汽压（121C）)灭20min.室温保存待用5. 4 EI)TA缓冲液(0. 5 mol/1.-pH 8. 0);称取 18. 61 g Na, EDTA · 2H,( 置于 100 mL.烧杯中.加人80mL水,用10%的Na()H济液，调节pH至8.0.加水定容至100ml.,103.4kPa蒸汽压(121C灭菌- NY/T 3875—202120min，室温保存待用。5. 5十二烷基磺酸钠溶液（SDS,10%)：称取10.00gSDS溶解于80mL水中，加水定容至100mL，103.4kPa燕汽压(121C)灭菌20min，室温保存待用。5.6氧化钠溶液(NaCI,5mol/L)；称取29.22gNaCI溶解于80mL水中，加水定容至100mL，103.4kPa蒸汽压(121C)灭菌20min，室温保存待用。5.7细胞裂解液I;取 Tris-HCI(0.5 mol/L,pH 8.0)缓冲液20 mL、EDTA(0.5 mol/L,pH 8.0)缓冲液5mL、NaCl落液(5.0mol/L)10mL、10