DB37_T 2472-2014猪骨骼肌肌纤维直径测定方法-硝化法.pdf

ICS 11. 220B 41DB37山東东省地方标准DB37/T 2472—2014猪骨骼肌肌纤维直径测定方法一硝化法Determination Method of Pig Skeletal Muscle fiber Diameter-nitroficationprocess2014-04-21发布2014-06-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 2472—2014前 言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，本标准主要起草人：呼红梅、武英、王彦平、郭建风、张印、刘俊珍、魏华珏、韩红、徐敏丽，I DB37/T 2472—2014猪骨骼肌肌纤维直径测定方法一硝化法1范围本标准规定了猪骨骼肌肌纤维直径测定中应用的试剂和仪器、样品处理、肌纤维直径测量，以及肌纤维直径校正值的计算，本标准适用于猪及其他备离肌肉的肌纤维直径测定2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语与定义下列术语和定义适用于本文件，3. 1肌纤维muscle fibers骨骼肌的单个细胞，呈纤维状，故肌细胞通常称为肌纤维。3. 2肌纤维直径muscle fiber diameter肌纤维直径是度量肌纤维粗细的指标，单位um。3. 3校正系数correction coefficient标尺对测微尺的校正值，校正肌纤维直径测量值，以提高肌纤维直径测定值的准确性。4原理利用硝酸的氧化作用使猪骨骼肌中蛋白质氧化、硝化变性，破坏结构蛋白和骨架蛋白使肌纤维分离，然后分散于甘油中，以进行肌纤维直径测量。5试剂、仪器5.1基本要求 DB37/T 2472—2014除另有说明外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。5.2硝酸溶液使用浓度为65%68%的分析纯硝酸配制体积百分比为20%的硝酸落液，硝酸落液需当天配制。5.3甘油丙三醇，俗称甘油。直接滴于载玻片上的样品中，使肌纤维分离于甘油中。5.4显微镜显微镜配备10借目镜、40倍物镜，目镜可与镜筒拆离，装入测微尺，测定肌纤维直径，6样品处理6.1取样取骨骼肌，剔除外周筋、腱、脂肪和肌膜后顺肌纤维走向取3cm×1cm×0.5cm（长×宽×高）内块，肉块展平固定于硬纸片上（两端固定），做好标记。6.2试样处理固定于硬纸片的试样置于硝酸溶液中，4～8℃C放置22h～24h取出，或是室温条件下浸泡20h~22h至试样呈黄色，用手术刀横向切取试样1删，用牙签测去外围的肉样，中间的肉样置于干净的载玻片上，滴上一滴甘油，然后用牙签数次轻压肉样，分离肌纤维，使其均匀分布，盖上盖玻片。7测量制作好的试样，置于10×40倍带目镜测微尺的显微镜下测量肌纤维直径。测量肌纤维直径时，选择边缘清晰完整的进行测量，测量时需清晰到肌纤维的横纹。每个试样测定100～200根为宜。8计算8.1记录肌纤维直径的测量值，肌纤维直径的测量值乘显微镜的校正系数，即为肌纤维直径的校正测量值，测定结果以平均数表示。CA = AXCF(1)式中：C4—肌纤维直径校正测量值（μm）：A——肌纤维直径测量值：CF—校正系数。8.2校正系数的计算：以显微镜为0LYMPUSB×51型倒置显微镜为例，标尺为0.01m，测微尺10：1000为例：测微尺安装在显微镜镜筒中10借目镜的下方，标尺放在载物台，在40倍物镜下标定测微尺，首先测微尺0起点对准标尺某一刻度，再观察标尺与测微尺那一刻度标尺对应，如标尺5个刻度即0.05m对应测微尺19个刻度，那么测微尺每个刻度为5/19×0.01=0.00263mm，0.00263×1000=2.63，测微尺每个刻度为2.63μm。也就是说如果测微尺测定的肌纤维直径为24，那么肌纤维实际直径2 DB37/T 2472—201424×2.63=63.12μⅢ。用显微镜为0LYMPUSBX51型倒置显微镜在10×40倍下测定肌纤维直径时，校正系数为2.63.CF =T/CT×0.01×1000 .(2)式中：7——标尺刻度数：CT一一对应测微尺刻度数。