NY_T 3138-2017饲料中艾司唑仑的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T料中艾司唑仑的测定高效液相色谱法Determination of estazolam in feeds-High performance liquid chromatography2017-12-22 发布2018-06-01实施中华人民共和国农业部-发布 NY/T3138—2017前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（广州）。本标准主要起草人：肖田安、方秋华、廖雁平、江庆娣、陈运勤、伍宏凯、胡苑玲。- NY/T 3138—2017饲料中艾司唑仑的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中艾司唑仑测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料以及精料补充料中艾司唑仑的测定。本标准中艾司唑仑的检出限为0.10mg/kg，定量限为0.25mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中的艾司唑仑在碱性条件下用正已烷一二氯甲烷提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱法检测，外标法定量。4试剂与材料除另有说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中一级水的规定。4.1艾司唑仑对照品：≥99.7%。4.2乙腈：色谱纯。4.3甲醇：色谱纯。4.4氯化钠。4.5碳酸钠。4.6石磷酸二氢钾。4.7二氯甲烷。4.83正已烷。4.9甲酸。4.10氨水。4.1110%碳酸钠水溶液：取碳酸钠100g，用水溶解并稀释至1000ml。4.122%甲酸水溶液：取甲酸2mlL,用水稀释至100mL4.135%氨水甲醇溶液：取氨水10ml,加甲醇至200ml，混勺。4.140.4%磷酸二氢钾溶液：取磷酸二氢钾4g，用水溶解并稀释至1000mlL。4.15提取液：取二氯甲烷与正已烷以体积比1：1的比例混匀。4.166艾司唑仑标准储备溶液（1.0mg/mL）：准确称取艾司唑仑标准品50.00mg，于50ml容量瓶中，用甲醇（4.3)溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1.0mg/ml的标准储备溶液。4℃保存，保存期6个月。4.17艾司唑仑标准工作溶液（50μg/ml)：准确量取艾司唑仑标准储备溶液（4.16)1ml，于20mL容1 NY/T 3138—2017量瓶中，用甲醇（4.3)稀释并定容，配制成浓度为50μg/ml的标准工作溶液。4℃保存，保存期3个月。4.18固相萃取柱：混合型阳离子交换柱60mg/3ml；或相当者。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量0.01mg。5.3天平：感量0.001g。5.4离心机：转速为5000r/min及以上。5.5水平振荡器。5.6涡旋混合器。5.7旋转蒸发仪。5.8固相苯取装置。5.9氮吹仪。5.10微孔滤膜：0.45μm，有机相。6试样制备按照GB/T14699.1的规定抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195的规定制备样品，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，充分混匀，装人磨口瓶中，密闭备用。7分析步骤7.1提取称取试料2g（精确到0.001g），于50ml聚丙烯离心管中。加人水20mL，用10%碳酸钠水溶液（4.11)调pH至8.5～9.0,加人氯化钠1g。加人提取液（4.15)15ml，中速振荡10min后，5000r/min离心5min，将上层有机相转入梨形瓶中。残渣再用提取液（4.15)15ml重复提取一次，合并提取液，在（35土2)℃下旋转蒸发至干。用5ml甲醇（4.3)溶解梨形瓶中的残留物，备用。7.2净化MCX固相苯取柱用3ml甲醇（4.3）、3ml.水活化，取备用液（7.1)过柱，用3ml.2%甲酸水溶液（4.12）、3ml甲醇（4.3）淋洗，用5%氨水甲醇溶液（4.13）6ml洗脱，收集洗脱液，45℃下氮气吹干，准确加入1.0ml.甲醇（4.3)溶解残渣，过0.45μm的滤膜，供高效液相色谱测定。7.3标准曲线的制备精密量取艾司唑仑标准工作溶液（4.17)适量，用甲醇（4.3)稀释，配制成浓度为0.20μg/ml、0.50μg/ml、1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、5.0μg/ml、10.0 μg/ml、20.0μg/ml.的系列标准溶液，供高效液相色谱分析。以色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求