YY_T 1465.5-2016医疗器械免疫原性评价方法 第5部分：用M86抗体测定动物源性医疗器械中α-Gal抗原清除率.pdf

YY中华人民共和国医药行业标准YY/T1465.5—2016医疗器械免疫原性评价方法第5部分：用M86抗体测定动物源性医疗器械中α-Gal抗原清除率Immunogenic evaluation method of medical devices-Part 5:Determination of α-Gal antigen clearance in medical devices utilizinganimal tissues and their derivatives with M86 antibody2016-07-29发布2017-06-01实施国家食品药品监督管理总局发布 YY/T 1465.5—2016前言YY/T1465(医疗器械免疫原性评价方法》，分为以下部分：第1部分：体外T淋巴细胸转化试验：第2部分；血清免疫球蛋白和补体成分测定ELISA法，第3部分：空斑形成胞测定琅脂固相法：第4部分：小鼠腹腔巨噬细胞吞鸡红细胞试验半体内法；第5部分，用M86抗体测定动物源性医疗器械中a-Gal抗原清除率，本部分为YY/T1465的第5部分。本部分按服GB/T1.1-2009给出的规则起草，请注查本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家食品药品监督管理总局提出。本部分由全国医疗器械生物学评价标准化投术委员会（SAC/TC248)归口。本部分起草单位：山东省医疗器械产品质量检验中心、四川医疗器械生物材料和制品检验中心、军事医学科学院野战输血研究所、烟台正海生物技术有限公司，本部分起草人：孙晓霞、刘成虎、袁嗽、杨晓琴、高红伟、宫锋、陆美娇、张东刚。 YY/T 1465.5—2016附录B（资料性附录）样品处理示例B.1总则样品处理宜确保α-Gal抗原的充分暴露，同时宜避免其被过度破坏。推举使用组织匀质仪”进行样品处理，其他等效的处理方法也可使用，但使用者宜对所选择的试验参数进行确认。B.2样品处理B.2.1骨质类样品对于骨植人物美样品，取100mg样品于1.5mL研磨瓶中，加8粒3mm和1粒5mm周瓷盈珠，转速为6800/min，30s/次，漫氮冷却研暨2次或更多次（同隔时间30s），至样品全部粉碎（粒径小于100m)，置干冰上备用。取适量试验样品精确称重并记录，政人0.5mL高心管中，加人1%BSA溶液0.1mL，取匀浆液进行信比梯度帮释，至少4个梯度。分别取40μL放在0.5mL离心管中备用。B.2.2干燥型样品却研离2次或更多次（间隔时间30s)，至样品全部粉碎（粒径小手100μm)，形成均匀组织匀浆。取匀B,2,3湿润型样品取适量试验样品，放于1.5mL无菌离心管内，真空干燥或37C干燥箱辅助干爆，然后取试验样品(≤300μg)，精确称重并记录，用尤菌眼科剪将样品剪载成适当大小，放进研磨瓶中，加人1%BSA案液300μL，加8粒3mm和1粒5mm陶登磁珠，转速为6800r/min，30s/次，液氮冷却研磨2次或更多次间隔时间30s)，至样品全部粉碎，形成均匀组织匀浆，取匀浆液进行倍比梯度稀释，至少4个梯度，分别取40μL放在0.5mL离心管中备用。1）BertinPrecellys24是适合的市售产品的实例，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如累其他等效产品具有相同的效累，则可使用这些等效产品，8 YY/T 1465.5—2016参考文献[1]Galili U, Shohet SB, Kobrin E, Stults CL, Macher BA, Man, apes, and Old World mon-keys differ from other mammals in the expression of alpha-galactosyl epitopes on nucleated cells. JBiol Cherm; 1988 Nov 25;263(33) :17755-62.[2J Galili U, LaTemple DC, Radic MZ. A sensitive asaey for mcasuring elpha-Gal epitope ex-pression on cells by a monoelonal anti—Gal antibody. Transplantation. 1998 Apr Z7 ;65(8) : 11z9-32.[3] Galili U. The a-Gal epltope (Galal-3Galp1-4GlcNAc-R) in xenotransplantation, Biochimie.2001 Jul;83(7) :557-63, Review,[4J Mscher BA, Galili U. The