SN_T 3064.7-2011国境口岸蝇类、蜚蠊携带重要病原体检测方法 第7部分：副溶血型弧菌.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3064.7--2011国境口岸蝇类、携带重要病原体检测方法第7部分：副溶血性弧菌Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port--Part 7 : Vibrio parahaemolyticus2012-04-01实施2011-09-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局，数码防伪 SN/T 3064.7-2011前創言SN/T3064《国境口岸蝇类、董携带重要病原体检测方法》分为11部分：--第 1部分：通用要求;第2部分：沙门氏菌；第3部分：志贺氏菌；一一一第 4 部分:致泻性大肠杆菌;一第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌;一第6部分：霍乱弧孤菌；一第7部分：副溶血性弧菌；一第8部分：金黄色葡萄球菌;—第9部分：蜡样芽孢杆菌；一第10部分：甲型肝炎病毒；第11部分：寄生虫卵（包囊）。本部分为SN/T3064的第7部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张海英、刘培、苏毅、高旗利、吴冬雪、张霞、张海滨。1 SN/T 3064.7---2011国境口岸蝇类、畵携带重要病原体检测方法第7部分:副溶血性弧菌1 范围SN/T3064的本部分规定了国镜口岸输人性蛇类和蛋携蒂副溶血性弧菌的检测方法、结果报告、阳性结果处置及血清学分型（根据需要）。本部分适用于检验检疫机构对输人性蝇类和携带副溶血性弧菌的检测和报告。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不奇少的。凡是注白期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单力适用于本文件。GB/T4789.7—2008　食品卫生微生物学检验’副溶血性弧菌检验GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂SN0173一1992出口食品副溶血性弧菌检验方法3样本检测3.1培养基和试剂实验所需培养基和试剂为科玛嘉弧菌显色培养基（CHROMgar:Vibrio）1），硫代硫酸钠-柠檬酸钠-胆盐-蔗糖琼脂（TCBS)，氯化钠三糖铁琼脂（TSf)，氰化钠营养琼脂，V-P半固体琼脂（VP)，鸟氨酸脱羧酶氯化钠肉汤（ODC），赖氨酸脱羧酶氟化钠肉汤（LDC),精氨酸双水解酶氯化钠肉汤（ADH），靛基质试验试剂：色氨酸氯化钠肉汤，糖类粉解试验用培养基O/F试验用培养基（HLGB），ONPG培养基，3%氯化钠碱性蛋白陈水，氯化钠蛋白陈水，氯化钠溶液，氧化酶试剂。具体成分及制备方法见GB/T4789.7--2008。除另有规定外，所用试剂为分析纯或生化纯水为蒸馏水。3.2检测程序副溶血性弧菌检测程序参见附录A。3.3操作步骤3.3.1增菌培养分别取1mL样本处理液加人到100mIL3%氯化钠碱性蛋白陈水增菌液中,将3%氯化钠碱性蛋白陈水增菌液于36℃±1℃培养18 h士1h。1）科玛嘉弧菌显色培养基（CHROMagarVibrio）是由法国博赛科玛嘉公司提供的产品的商品名。给出这信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1 SN/T 3064.7—20113.3.2分离培养用接种针取增菌后的培养物四区法划线接种于TCBS平板或科玛嘉弧菌显色平板上，36℃土1℃培养 18 h土1 h。副溶血性弧菌在TCBS平板上的典型菌落呈圆形，边缘整齐、湿润、稍混浊、半透明，多数具尖心、斗笠状，蓝绿色菌落，直径2mm～4 mm;在科玛嘉弧菌显色培养基上呈现为圆的、表面光滑的粉紫色菌落,直径2mm～3mm。3.3.3纯化菌落在TCBS平板或科玛嘉弧菌显色培养基平板上如出现可疑菌落，应挑取5个菌落，分别接种于氯化钠营养琼脂，36℃±1℃培养24h士3h。若平板上的可疑菌落少于5个，则应该全部挑取传代培养。用该纯培养物进行初步生化试验。3.3.4革兰氏染色与镜检具体操作步骤见GB/T4789.28,副溶血性弧菌为革兰氏阴性，棒状或弧状，无芽孢。3.3.5初步生化筛选氧化酶试验具体操作步骤见GB/T4789.7-2008中5.5.1，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。嗜盐性试验具体操作步骤见GB/T 4789.7—2008中5.5.4。氯化钠三糖铁试验接种氯化钠三糖铁斜面，穿刺底层并划线斜面。36℃士1℃培养18h士1h。反应结果解释如下：a）琼脂底层：黄色：葡萄糖发酵阳性（发酵葡萄糖）红色或者未变色：葡萄糖发酵阴性（不发酵葡萄糖）；黑色·产生硫化氢;I气泡或者爆裂：葡萄糖发酵产气。b）琼脂斜面：一黄色：乳糖或蔗糖利用阳性