SNT 2464-2010洋葱条黑粉病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2464-2010洋葱条黑粉病菌检疫鉴定方法Identification of Urocystis cepulae Frost2010-01-10发布2010-07-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局余层查设“数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准洋葱条黑粉病菌检疫鉴定方法SN/T 2464—2010?中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www.spc. 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×1230　1/16　印张0.5 字数 ８千字2010年4月第一版 2010年4月第一次印刷印数 1-1 600*书号：155066·2-20704 SN/T 2464—2010前言本标准的附录 A 和附录 B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：廖芳、罗加凤、郭京泽、张裕君、刘跃庭、崔铁军、王金成、刘鹏。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2464—2010洋葱条黑粉病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了进出境植物检疫中洋葱条黑粉病菌(Urocystis cepulae）的检疫鉴定方法。本标准适用于葱属寄主上洋葱条黑粉病菌的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法3原理洋葱条黑粉病菌(Urocystis cepulae Frost)主要为害葱属（Allium spp.）植物，不危害葱属以外的植物。洋葱条黑粉病菌寄主范围、孢子球形态特征、寄主植物的症状(参见附录 A）、洋葱琼脂培养基上孢子球萌发特性是鉴定该病菌的依据。4仪器和用具多功能显微镜（具测微尺）、体视显微镜、手持放大镜、低速离心机、往复式振荡器、涡旋振荡器、干热灭菌器、高压灭菌器、普通天平（感量1/100g）、生物安全柜或超净台、生物培养箱（具光照）、可调微量加样器（5 μL～200 μL）、三角瓶（250 mL）、离心管、载玻片（长×宽为 25.3 mmX76.2 mm，厚 0.8 mm）、盖玻片（18 mmX18 mm）、Parafilm 膜或铝箔纸、Eppendorf 管（1.5mL）、培养皿、接种针、三角推。5试剂和培养基5.1 试剂有效成分为0.25%的次氯酸钠溶液、吐温-20（Tween-20）、席尔氏浮载剂（见GB/T18085一2000附录A中席尔氏浮载剂配制方法）、封片剂、无荧光显微镜物镜镜头油（Nd=1.516）、琼脂粉、灭菌水。5.2培养基洋葱琼脂培养基用于病原菌培养性状的观察及病原菌的保存。洋葱琼脂培养基的制备：称取琼脂粉15g～20g，加人900mL水和100mL新鲜的健康洋葱汁液，装人三角瓶中,121℃高压灭菌 30 min,待冷却至40℃左右,倒人培养血,凝固后，用三角推蘸取悬浮液均匀涂布在培养基表面。6实验室检验6.1种子的洗涤检验6.1.1样品制备及离心与定容按GB/T18085执行。6.1.2镜检按GB/T18085检查洋葱条黑粉病菌孢子球的有无及其形态大小，经检查含有可疑孢子球的进一步作萌发实验。1 SN/T 2464—20106.2鳞茎与寄主残体的检验用放大镜或肉眼仔细检查鳞茎或寄主残体表面是否存在银灰色泡状囊肿，用针刺破银灰色泡状囊肿，用席尔氏浮载剂制成玻片，在显微镜下观察孢子球的形态大小,并将可疑孢子球进一步作萌发实验。6.3孢子球的萌发试验在 Eppendorf 离心管中加人适量次氯酸钠溶液，挑取一定数量的孢子球放入，密度以显微镜低倍视野下 40 个～60 个孢子球为宜,用涡旋振荡器混合，消毒 5 min 后，以3000 r/min离心1 min，立即用微量加样器吸去上清液，加无菌水离心清洗2次，将孢子球沉淀物转至洋葱琼脂培养基上培养，在20℃、12 h光照、75%的相对湿度条件下生物培养箱中培养,重复3个培养皿。7鉴定特征7.1鳞茎与寄主残体的症状种子发芽后2周内，病菌从子叶基部等处侵人，病苗叶色微黄，局部膨肿扭曲，银灰色纵向排列的不透明的泡状瘤肿出现在子叶和叶片上，随后破裂露出黑褐色的孢子团，成株期的叶、叶鞘和鳞片出现银灰色瘤肿条斑，病部充满黑粉，重病株矮化或死亡7.2孢子球形态特征洋葱条黑粉病菌的孢子球由许多细胞组成,孢子球直径15 μm～20 μm,多为