蛋白质相互作用.pptVIP

Two-Hybrid的优点： 是酵母细胞内的in vivo相互作用。 只需要cDNA，简单。 弱的相互作用也能检测到。 当前第31页\共有64页\编于星期三\15点 Two-Hybrid的缺点： 都是融合蛋白，万一融合出新的相互作用。 酵母的翻译后修饰不尽相同。尤其是蛋白质的调控性修饰。 自身激活报告基因。 都基因库的要求比较高，单向1/3是in frame 蛋白质毒性。 第三者Z插足介导的相互作用。 假阳性。 当前第32页\共有64页\编于星期三\15点 lacZ UAS DB X lacZ DB X Auto activation BD X Marker1 AD Y lacZ UAS AD Y lacZ AD Y Marker2 当前第33页\共有64页\编于星期三\15点 Phage display（噬菌体展示） 当前第34页\共有64页\编于星期三\15点 Phage display（噬菌体展示） Phage display的最大优点是数量大 细胞：108~109 细菌：1010 Phage：1012 寻找受体的配体 7肽：8x1016 当前第35页\共有64页\编于星期三\15点 蛋白质-蛋白质直接相互作用 Co-immunoprecipitation and antigen-antibody interaction（免疫共沉淀和抗原抗体结合） Affinity interaction（亲和作用） Yeast two-hybrid and phage display（酵母双杂交和噬菌体展示） Surface Plasmon Resonance FRET Proteomic analysis（蛋白质组学技术） 当前第36页\共有64页\编于星期三\15点 SPR is used to monitor interactions occurring in a biospecific surface on a metal layer by measuring changes in the solute concentration at this surface as a result of the interactions. Surface Plasmon Resonance 当前第37页\共有64页\编于星期三\15点 当前第38页\共有64页\编于星期三\15点 SPR 优点：无标记、实时 Label-free detection SRP does not require any labels or reporter groups to detect biomolecular interactions. It follows every step in a multi-step analysis procedure, in contrast to label-based methods that often only report the final step. Real time measurement The progress of interactions is displayed directly, as a plot of response (which is directly related to concentration changes at the surface) against time. Immediate feedback on the status of an interaction speeds up assay development and analysis. The results can be processed further after the run, for example to extract kinetic constants for the interaction. 当前第39页\共有64页\编于星期三\15点 蛋白质-蛋白质直接相互作用 Co-immunoprecipitation and antigen-antibody interaction（免疫共沉淀和抗原抗体结合） Affinity interaction（亲和作用） Yeast two-hybrid and phage display（酵母双杂交和噬菌体展示） Surface Plasmon Resonance FRET Proteomic analysis（蛋白质组学技术） 当前第40页\共有64页\编于星期三\15点 Donor Acceptor (2-10nm) Excitation frequency Emission frequency = Excitation frequenc