SNT 1943-2007小麦中转基因成分PCR和实时荧光PCR定性检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1943-2007小麦中转基因成分PCR和实时荧光PCR定性检测方法Protocol of polymerase chain reaction and real-time PCR for qualitativedetecting genetically modified components in transgenic wheat2007-08-06 发布2008-03-01实施较数0糖 变词胰中华人民共和国发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准小麦中转基因成分PCR和实时荧光PCR定性检测方法SN/T 1943—2007中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. . cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*印张0.75字数 16 千字开本 880×1230 1/162007年11月第一版　2007年11月第次印刷印数 1—2000书号：155066·2-18225 SN/T 1943—2007前言本标准的附录 A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局、中国检验检疫研究院负责起草。本标准主要起草人：栾凤侠、张洪祥、白月、高勇、黄文胜、徐宝梁。本标准中如涉及国内已申请的专利，专利持有人声明放弃在中国境内的使用。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T :1943—2007小麦中转基因成分PCR和实时荧光PCR定性检测方法范围1本标准规定了小麦中转基因成分 PCR 和实时荧光 PCR检测方法。本标准适用于小麦中转基因成分 PCR 和实时荧光 PCR 的定性检测2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新腋本适用于本标准。·GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T 1193基因检测实验室技术要求SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样芳法3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1.1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他功能DNA库刻!生物学手段导人，使其在该物种中表达，以便该物种获得新的性状特征3. 1.2转基因成分genetically modiftnent物种本身不具有的、而是来源于其他物种的功能基因序列。3. 1.3内源基因 endogenous reference gene在转基因作物基因组中拷贝数恒定的不显示等位基因变化的-在其他品种作物中不存在的基因。该基因即可用于评价样品中是否存在该作物品种也可作为参照基因序列对某一目的基因进行定量检测，同时还可确定DNA 提取是否成功、并验证PCR反应体系中是否存在抑制物质。3.1.4外源基因exogenous gene利用生物工程技术转人的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。3.2缩略语下列缩略语适用于本标准。3. 2. 1 bar: phosphinothricin acetyltransferase gene from Bacillus amyloliquefacions,来源于杆菌Bacillus amyloliquefacions 草丁麟乙酰转移酶基因。3.2.2Ct:cycle threshold,每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时经历的循环数。3.2.3 GAG56D:triticm aestivum partial GAG56D gene for gamma-gliadin,小麦醇溶蛋白基因(GeneBank?编号:GI。是小麦属特异性内源基因。3.2. 4 NAC:no amplification control,阴性对照。 SN/T : 1943--20073.2.5 NOS:terminator of nopaline snthase gene from Agrobacterium tumefaciens ,来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子。3.2.6 NTC:no template control,空白对照。3.2.7 Ubiquintin:玉米泛素蛋白基因启动子3.2.8 uidA:betaglucuronidase(GUS)reporter gene from E.coli,大肠杆菌转 β-葡糖苷酶基因。3.2.9Wx012:wheat waxiness gene,小麦蜡质基因,是小麦物种特异性内源基因。防污染措施