SNT 2357-2009可疑样品中烟曲霉毒素现场排查检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2357—2009可疑样品中烟曲霉毒素现场排查检测方法Spot investigation and examination methods forfumonisins in suspicious samples2009-07-07发布2010-01-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局011251流行 SN/T 2357~2009言前本标准的附录 A 为规范性附录,附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国吉林出人境检验检疫局负责起草本标准主要起草人：杨怀宁、浦、赵大力、谢兵、程秀吉、冯华、柴景春、王勇、邹红、王娣、王振国、石建平。本标准为首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2357—2009可疑样品中烟曲霉毒素现场排查检测方法1范围本标准规定了国境口岸可疑样品中烟曲霉毒素现场排查检测方法、结果报告、阳性结果处置。本标准适用于国境口岸可疑样品中烟曲霉毒素的现场排查检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件；其最新版本适用于本标准。GB/T 601化学试剂标准滴定溶液的制备GB19489实验室‧生物安全通用要求SN/T1861—2007出人境口岸突发公共卫生事件应急处理规程总则3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1烟曲霉毒素　fumonisins,FS珠镰孢菌所产生的一类水溶性代谢物，热稳定性高，蒸煮不易又称伏马毒素，是由轮枝镰孢菌！3被破坏，目前已知的有11种衍生物，其中主要的是烟曲霉毒素 Bi，其毒性最强。常见烟曲霉毒素还包括B2 和 B3。该类毒素对大鼠、小鼠、家兔|猪、丰等中枢神经系统有较强毒性，可引起动物的强烈痉挛乃至死亡。此种毒素也对人类健康构成威胁,有致癌性;若感染可诱发食道癌、肝癌、胃癌等疾病。烟曲霉毒素广泛分布在土壤中，尤以韬田土样中检出率高，因此极有可能污染粮食和饲料，对人畜的健康造成潜在威胁。3.2可疑样品suspicious samples从发现明显的被污染状况、极易发现和鉴别出污染物或可能发现和鉴别出污染物的整批货物中所采集的样品。4 对象包含可能被烟曲霉毒素污染的下列物品的人出境货物或人员携带物：一可疑粉末（检测限量标准参照“供人类食用的玉米及玉米产品”）；供人类食用的玉米及玉米产品；玉米原料;-玉米饲料。5可疑样品处理5.1用于ELISA检测的可疑样品处理粉碎5g可疑样品与25mL70%甲醇溶液混合；-振荡3min; SN/T 2357--2009用 Whatman No.1或相当的滤纸过滤；-1份滤液用13份双蒸水或去离子水稀释；取50μL稀释液进行分析。注：根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加（USDA/GIPSA1)检测称取样品50g+250mL甲醇）。5.2用于单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法检测的可疑样品处理一粉碎25.0g可疑样品置于均质杯中；加人2g氯化钠和50mL的甲醇-水（容量比4：1），盖上均质盖子；高速均质2min,静置10 min;将提取液用槽纹滤纸过滤，用100mL的烧杯收集滤液；一取10mL滤液于烧杯中，加人40mL的PBS缓冲溶液混匀；经玻璃纤维滤纸过滤，用50mI的烧杯收集滤液，待用。6准备检验设备、器材及试剂的准备见附录A。7检验方法7. 1 酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测7.1.1检测注意事项以供人类食用的玉米及玉米产品中烟曲霉毒素的检测为例，其他检测对象可依此例进行检测；按商品化试剂盒的说明书操作，下面以RIDASCREEN烟曲霉毒素检测试剂盒2)为例；使用之前将所有试剂回升至室温；使用之后立即将所有试剂放回2℃～8℃；在使用中不要让微孔干燥；在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是 ELISA测定程序中的要点；在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖子盖住微孔板。7.1.2.包被有抗体的微孔板条锡箔袋沿横向压皱外边打开，取出需用数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2℃～8℃,不要冷冻。7.1.3标准液根据检测对象和限量标准的不同，配制不同浓度范围的烟曲霉毒素标准液，并制定相应的标准曲线。此试剂盒烟曲霉毒素标准液为直接应用液，标准液浓度为：0mg/kg，0.222mg/kg，0.666 mg/kg，2mg/kg，6mg/kg,已经考虑了样品制备的 70 倍