NYT 1465-2007牛羊胃肠道线虫检查技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1465—2007牛羊胃肠道线虫检查技术Identification techniques for gastrointestinal nematodesof cattle and sheep2007-12-18 发布2008-03-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1465—2007前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院兰州兽医研究所。本标准主要起草人：才学鹏、景志忠、李辉、王佩雅、窦兰清、靳家声。I NY/T 1465—2007牛羊胃肠道线虫检查技术1范围本标准规定了牛羊胃肠道线虫虫卵、幼虫和成虫的检查方法。本标准适用于牛羊胃肠道线虫病的诊断和流行病学调查及检疫。2虫卵检查方法2.1饱和盐水浮集法2.1.1材料100mL烧杯;60目铜纱网;15mL试管；载玻片和盖玻片；玻璃棒；镊子；显微镜；天平；饱和盐水（参见附录A1）。2.1.2方法取粪样3g放人100mL烧杯内，加10mL饱和盐水，用玻璃棒将粪便搅拌调匀，再加人20倍量的饱和盐水，经铜纱网滤过，将滤液盛满试管，使液面略高于管口（以不外溢为准)，盖上盖玻片，待10 min～15min 后,将盖玻片取下置载玻片上在显微镜下检查。2. 1. 3 结果判定(参见附录 B.1 和 C.1)消化道线虫虫卵一般呈圆形、椭圆形,色淡黄,大小在 50 μm～150 μm之间,外有卵壳,壳内有卵胚细胞或幼虫;线虫虫卵的形态一般难以区分，只有马歇尔线虫（B1－4）、细颈线虫（B1－6)和毛首线虫(B1-12)虫卵的特征明显,可作为鉴别检查。2.2虫卵计数法(麦克马斯特氏法)2.2.1 材料100mL装有玻璃球的玻璃瓶;100 mL烧杯；铜纱网；1mL吸管；镊子；天平；麦克马斯特虫卵计数板（见下图）；显微镜；饱和盐水。1.7 cm7.5 cm000002.2.2方法将粪便混匀，称取2g放人装有玻璃球的小瓶内，加人饱和盐水 58mL，即总体积为60mL，充分振荡混合，通过铜纱网滤过,将粪液边振荡边以吸管吸出少量滴入虫卵计数板计算室内，随即将虫卵计数板移到显微镜台上，静置1 min～2 min，在低倍镜头下将两个正方格内所见虫卵全部数完，除 2,乘以200,即为每克粪便中的虫卵数。为准确起见，每份样品可做2次～3次检查,求出平均虫卵数。2.2.3结果判定1 NY/T 1465—2007虫卵计数的计算公式,两个方格内的虫卵数×200=1 g 粪便虫卵数(EPG)23第三期幼虫检查方法3.1材料直径15cm的带盖玻璃皿;滤纸;木炭末；恒温箱；显微镜；贝尔曼氏分离装置；卢戈尔氏液（参见附录 A5);0.02%硫柳汞溶液。3.2　方法取新鲜粪便或经水洗沉淀后所收集的粪渣放入底部铺有滤纸的带盖玻璃皿内，加人适量的木炭末及水，并加人少许0.02%硫柳汞溶液拌成糊状，堆成山峰样，使顶部稍高于Ⅲ的边缘，然后加盖与粪堆相接触。置 25℃～30℃条件下,经常保持皿内湿度(加水或加灭菌粪液),待 5d～7d后，多数虫卵即可发育成第三期幼虫,并集中于皿盖上的水珠或皿内液体中，吸取幼虫镜检，或用贝尔曼氏装置收集幼虫。镜检新鲜的幼虫，可在载玻片上滴加卢戈尔氏液染色观察。应注意幼虫的大小、长度、宽度、虫体局部与整个体长的比例，通过食道的长度、尾部的长度和它们的构造，体细胞的排列、数目、形状等加以区别。3.3结果判定第三期幼虫形态特征如下(参见附录 B.2 和 C.2)：3. 3. 1 血矛属(Haemonchus)(图 B.2. 1)虫体较小,长 0.7 mm～0.8mm。肠细胞为 16 个尖三角形,但于最后 1对并齐排列。尾部有长丝状的尾鞘，长0.15mm～0.18mm。排泄孔呈朝前方倾斜状，位于食道后1/3处之上。3.3.2奥斯特属(Ostertagia)(图 B.2.2)虫体较毛圆属为大，长0.83mm～0.95mm。肠细胞同样为16个三角形。尾鞘也呈尖锐形，长为0.12mm～0.14 mm。尾端无小刺结构，排泄孔位于食道后1/3处之下。3.3.3古柏属(Cooperia)(图 B.2.3)虫体较大，长0.83mm～0.99mm,肠细胞同样为16个三角形。尾鞘细长，呈长丝状，长0.16mm~0.18 mm。阴门位于靠近肛门,排泄孔位于食道后 1/3处之下。3.3.4 马歇尔属(Marshallagia)(图 B.2.4)虫体细长,不包括鞘长 0.686 mm～0.833mm。肠细胞13～14个,有的呈节状,有的呈小颗粒状。食道呈细杆状，长0.122mm。排泄孔位置不清。肛门距尾端0.083mm，尾部呈锥形。3.3.5毛圆属(