SN_T 3268-2012鼠类携带病原体检测标本的保存方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3268—2012鼠类携带病原体检测标本的保存方法Preservation methods of specimen of rodents for the pathogens detecting2012-10-23发布2013-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准鼠类携带病原体检测标本的保存方法SN/T 3268--2012*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100045)总编室：（010址 www. spc. net. cn中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 0.5字数９千字2013年3月第一版2013年3月第一次印刷印数1—1600*书号：155066·2-24705 SN/T 3268-2012前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国二连浩特出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：孙肖红、乔舜、孙时、宋锋林、田丽、张晓龙、魏莲、魏怀波、杨永莉、杨宇、王静。1 SN/T 3268—2012鼠类携带病原体检测标本的保存方法1 范围本标准规定了鼠类携带病原体检测用标本的保存方法本标准适用于国境口岸检验检疫部门开展鼠类携带病原体的检测用标本的保存。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求病原微生物实验室生物安全管理条例（2004）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1rodent鼠类与鼠传疾病有关的鼠形动物（包括啮齿目、兔形目和食虫目动物）。3.2检测标本specimen用来作为病原体检测的样本，主要包括鼠类脏器（如：心、肺、肝、脾、肾、肠等），血液（全血、血清），脑组织、肌肉组织以及体表寄生虫（如蚤类、蜱类、螨类等），排泄物（粪、尿）。4实验室条件及防护要求4.1总则检测标本的处理应在生物安全2级及以上实验室中进行。生物安全2级及以上实验室的要求要符合GB19489和《病原微生物实验室生物安全管理条例》中同级别实验室的要求，并按照以上两个标准的要求来进行个人防护。4.2个人防护用具白色或浅色连体防护服、白色长筒袜、长筒雨靴、无粉手套、口罩、眼罩/防护眼镜等。4.3冷藏设备超低温冰箱（—60℃～—80℃）、低温冰箱（一20℃～—40℃）、普通冰箱(2℃～4℃）、液氮罐。4.4保存用材料液氮、干冰、冰架、2 mL细胞冻存管、0号自封袋、试管（5mL～20 mL）、带盖塑料盒、油性记号笔。1 SN/T 3268—20124.5组织、脏器保存液组织脏器保存液的配制见附录A。5检测标本的保存方法5.1冷冻保存用于细菌、病毒分离和检测的组织、血清等所有样本可选择不同的存贮容器直接冷冻保存（一80℃冰箱），也可用化学制冷剂(如干冰)或在液氮罐中保存5.2保存液保存针对鼠疫耶尔森菌检测的组织或脏器的样本可用20%中性甘油盐水保存。针对病毒检测的组织样本可在50%甘油磷酸盐缓冲液中保存，在5℃条件下保存数周；也可用组织保存液保存；或保存于RNAlater)保存液（用于核酸检测的样本方可用这种方法，但无法再进行病原分离检测），样品保存液中保存的新鲜样品37℃下稳定保存1d,18℃～25℃保存7d,2℃～8℃稳定4周，一20℃长久保持（见附录 A)。5.3滤纸吸附保存(血纸条)在解剖动物取材的过程中用·2cmX5cm的普通滤纸条蘸取动物胸（腹)腔或者取血部位，以血液浸湿至滤纸长度的一半处为准，自然晾干后装人样本塑料袋常温或者冷冻保存即可。对于抗体检测试验如血凝试验、胶体金试验，酶联免疫吸附试验适用该保存方法。5.4鼠类携带医学媒介生物的保存5.4.1分类鉴定将从鼠体上梳检下来的医学媒介生物如蚤、蜱、螨等置于试管中，做分类鉴定。做好分组标识记录。5.4.2分装将鉴定后分组后的医学媒介生物装人小玻璃瓶，用1：200.000龙胆紫2%盐水清洗3次，尽快送检。需要做保存的，应按照鉴定分组装人1：200000龙胆紫2%盐水试管中，上面放灭菌脱脂棉球，确保标本沉人保存液中，保存不超过3个月。5.4.3冻存将标本直接装人带盖离心管、一拉得塑封袋或其他包装内，根据保存时间长短选择温度段冷冻保存。3d内2℃～8℃保存即可,1周内一20℃～一30℃保存,超过1 周的应保存在－60℃～一80℃超低温冰箱或液氮中。5.4.4活体保存如需要短期保