SN_T 3767.3-2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第3部分：玉米Bt-11品系.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3767.3—2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法第3部分：玉米Bt-11品系Loop-mediated isothermal amplification detection method for geneticallymodified components in food for export-Part 3: Maize Bt-112014-08-01实施2014-01-13发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局真伪刮涂层 SN/T 3767.3—2014前創言SN/T3767《出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP)检测方法》共分为30部分：第1部分：通用要求和定义；第2部分：筛选方法；第3部分：玉米Bt-11品系；第4部分：玉米Bt176品系；第5部分：玉米GA21品系；第6部分：玉米MIR162品系；第7部分：玉米MIR604品系；第8部分：玉米MON810品系；第9部分：玉米MON863品系；第10部分：玉米MON88017品系；第11部分：玉米MON89034品系；第12部分：玉米T-25品系；第13部分：玉米3272品系；第14部分：玉米59122品系；第15部分：大豆A2704-12品系；第16部分：大豆A5547-127品系；第17部分：大豆DP356043品系；第18部分：大豆GTS40-3-2品系；第19部分：大豆MON89788品系；第20部分：水稻Bt-63品系：第21部分：水稻KF6品系；第22部分：水稻KF8品系；第23部分：水稻KMD品系；第24部分：水稻LLRICE62品系；第25部分：水稻M12品系；第26部分：水稻T1C-19品系；第27部分：水稻T2A-1品系；第28部分：小麦B73-6-1品系；第29部分：甜菜H7-1品系；第30部分：油菜RT-73品系。本部分为SN/T3767的第3部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、广州迪澳生物科技有限公司。本部分主要起草人：徐君怡、郑秋月、徐杨、刘金华、曹际娟、李志勇、徐静、赵昕、石磊、凌莉、常彦磊、刘津、唐大运。I SN/T 3767.3--2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法第 3部分：玉米Bt-11品系1 范围SN/T3767的本部分规定了食晶中转基因玉米Bt-11·品系特异性的环介导等温扩增（LAMP)初筛检测方法。本部分适用于玉米及其加工产品中转基因玉米Bt-11品系特异性的定性检测。本方法的定性检测低限为0.5%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测：实验室技术要求核酸提取纯化方法GB/T19495.3转基因产品检测核酸定量 PCR检测方法GB/T 19495.5转基因产品检测·抽样和制样方法GB/T 19495.7转基因产品检测第2部分：检测方法SN/T 3767.2—2014　出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP）筛选方法3防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T19495.2的规定。4抽样与制样按照GB/T19495.7的规定执行。核酸提取纯化5按照GB/T19495.3的规定执行。6LAMP检测方法6.1原理6.1.1 一般原理根据转基因玉米 Bt-11品系外源基因和玉米边界序列设计特异性内引物、外引物和环引物各一对， SN/T 3767.3—2014特异性目标序列和引物碱基序列参见附录A。引向特异性识别目标序列上的六个独立区域，利用Bst酶启动循环链置换反应，在玉米Bt-11品系特异目标序列启动互补链合成，在同-一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA 混合物；从 dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg²+结合，产生副产物（焦磷酸镁)形成乳白色沉淀，加人显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。6.1.2显色液显色原理SYBR Green I是一种高灵敏的 DNA荧光染料，可以嵌人方式结合到双链DNA的小沟内。当它与双链DNA结合时，荧光信号是游离状态的800～1000倍。在不发生扩增反应时，SYBR染料分子的荧光信号不发生改变，颜色显现为橙色；当发生扩增反应时，随着双链DNA的增加