WS 231-2002用于纸片扩散法抗生素敏感试验的脱水Mueller-Hinton琼脂的检验规程.pdf

C 50wS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 231—2002用于纸片扩散法抗生素敏感试验的脱水Mueller-Hinton 琼脂的检验规程Protocols for the evaluation of dehydrated Mueller-Hintonagar in the disk diffusion procedure forantimicrobial susceptibility testing2002- 04- 20 发布2002-07-01实施中华人民共和国卫生部发布 WS/T 231--2002前言本标准是在卫生部颁发的《全国临床检验操作规程》第二版)的基础上，参考 NCCLS标准，结合中国国情及卫生系统的实际情况和要求而制定。本标准从2002年7月1日起实施。本标准由卫生部医政司提出。本标准的附录 A 是标准的附录,附录 B、附录 C都是提示的附录。本标推由北京大学人民医院负责起草。本标准主要起草人：张正、杨婧、赵晓涛本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负贵解释。 中华人民共和国卫生行业标准用于纸片扩散法抗生素敏感试验的脱水WS/T 231—2002Mueller-Hinton 琼脂的检验规程Protocols for the evaluation of dehydrated Mueller-Hintonagar in the disk diffusion procedure forantimicrobial susceptibility testing范围1本规程规定了评价Mueller-Hinton琼脂(M-H琼脂）产品批号的要求，包括制造商评价(M-H琼脂)产品批号的规则及评价新的参考培基的规则。本规程仅适用于评价纸片扩散法抗生素敏感试验用M-H琼脂的检验，而不能保证M-H琼脂在其他试验中的质量，例如琼脂稀释或抗生素梯度试验。2 材料2.1质控标准菌株用ATCC的冻干标准菌株制备质控菌株，根据ATCC的规定复苏菌种。所需的菌种有：金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠埃希菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853，粪肠球菌ATCC33186（或ATCC29212），金黄色葡萄球菌ATCC43300和大肠埃希菌ATCC35218。2.2菌株TSA培基培养将质控菌种的复苏液接种于两或三个含5%羊血的大豆-酪蛋白消化琼脂(TSA)平板上，置 35℃环境中孵育 18 h～24 h。2.3肉汤增菌孵育结束后检查纯度并收获平板上的全部生长物。在含有15%甘油的大豆-酪蛋白消化肉汤（TSB)中悬浮。（15%TSB的制备：將脱水肉汤培养基30g溶于大约500mI去离子永中，并添加150mL的甘油，定容至1L，混匀，121℃15min高压灭菌）。2.4标准菌株复苏接种平板的前一天,将所需的质控菌种每种各融化一瓶，接种至含5%羊血的TSA平板上，在 35℃环境中孵育18 h～24h。孵育后，如果检查纯度满意，这些菌株就可以用于接种待测M-H培养基，按WS/T125—1999《纸片法抗菌药物敏感试验标准》操作。2.5质控菌种的更新定期用ATCC 的新鲜冻干标准菌株更新贮存菌种。3 试验方法及流程3.1严格按照我国已有标准(WS/T I125)中规定的步骤和时间进行纸片扩散法抗生素敏感试验。3.2按照下面的时间表进行试验。3.2.1 第一天中华人民共和国卫生部2002-04-20批准2002-07-01实施1 WS/T 231200培养基制备:将 38.0 g的脱水 Mueller-Hinton 培养基加至1 L去离子水或纯净水(中国药典标准)中。煮沸1 min，121℃15 min灭菌。冷却至大约50℃时倒板。倒板，使培养基厚度为 4mm～5mm(通常150 mm规格平血需 70mL)。对应于第2.1条中罗列的前三种质控菌，每种培养基（产品批和主要参考标准批)准备三个平板。对应于剩余的三个质控菌,每种培养基准备一个平板。另外每种培养基准备一个平板测定pH 值。 如 WS/T 125中所述,在 25℃测定 pH值。pH 值应为 7.2～7. 4。在制造商试验数据报告表(附录B)上记录检测批和参考批的pH 值。如第2.4条所述，将冻存的质控菌株融解，用含5%羊血的TSA平板做传代培养。3. 2. 2 第二天检查第一天制备的平板。如果平板表面过于潮湿，应将其置于35℃孵箱中或置于室温层流橱中，直至多余的水分蒸发掉。培养基表面应湿润，但不能有水滴。培养皿盖也不应有水滴。在质控菌培养平板上挑取儿个菌落，按WS/T125所述，将生长物在TSB中悬浮，并调整浊度为0.5麦氏标准（约（1～2)×10cfu/mL），制备标化培养物。接种下述每个质控菌的标化接种物，每种培养基接种三个平板：金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠埃希菌