SNT 1247-2007猪繁殖和呼吸综合征检疫规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1247-2007代替 SN/T 1247.1~1247.2--2003猪繁殖和呼吸综合征检疫规范Quarantine protocol for porcine reproductive and respiratory syndrome2008-03-01实施2007-08-06 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局0x2 190毒 查胰存数码防伪 SN/T 1247—2007前創言本标准代替SN/T1247.1—2003《猪繁殖和呼吸综合征间接免疫荧光试验》和SN/T1247.2—2003《猪繁殖和呼吸综合征免疫过氯化物酶单层试验》。本标准的附录 A、附录 B、附录 C 和附录 D 是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：孙颖杰、张伯强、白泉阳、苏永生、简中友、袁文泽、赵祥平、董志珍本标准所代替标准的历次版本发布情况为：--SN/T 1247.1—2003;-SN/T 1247.2—2003。1 SN/T 1247—2007猪繁殖和呼吸综合征检疫规范1范围本标准规定了猪繁殖和呼吸综合征(PRRS)的检疫规范。本标准适用于猪繁殖和呼吸综合征的病毒分离鉴定、病毒抗原监测、病毒抗体检测，可用于该病的检疫、诊断和流行病学调查。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T18090一2000．猪繁殖和呼吸综合症诊断方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准3. 1immunoperoxidase monolayer assay(IPMA)免疫过氧化物酶单层试验培养的单层细胞，接种PRRS病毒或处理过的被检样品，让30啥～50%细胞感染，经组织固定和内源酶处理,加被检血清或阳性抗体处理，再加酶标抗抗体,经过显色反应检测抗原或抗体的存在。在PRRS诊断上最早用于检测其抗体3.2nt ahtibody test(IFA)间接免疫荧光试验 indiredt fluoresc成切片或涂片的标本经过囤定后，加抗血精处理，再加荧光标记的抗抗体染色，漂洗，滴加缓冲甘油后用盖玻片封载，用荧光显微镜进行检测。检测抗体/可用于卓期诊断。4 疾病概述bry，美yndrome，PRRS），也称为蓝耳病猪繁殖和呼吸综合征（potcine _reproductive.ind aTO(Blue-eared Disease），是由猪繁殖和呼吸综合征病毒（porcinereproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪及脊成猪呼极困难为特征的接触性传染病。繁殖障碍的特征是流产、死胎和产弱仔，弱仔由于呼吸道疫病和继发感染常常很快死亡；呼吸道特征是仔猪及育成猪呼吸困难,年龄较大的猪可能出现温和性呼吸道症状，有时因继发感染而使病情复杂。其病原、流行病学、诊断以及检疫与诊断参见附录 A。5 检疫方法5.1病毒的分离与鉴定（见GB/T 18090—2000)5.1.1设备、材料和试剂器材：96孔或48孔细胞培养板、微量移液器、恒温水浴箱、二氧化碳恒温箱、普通冰箱及低温冰箱、离心机及离心管、组织研磨器、孔径0.2μm的微孔滤膜、普通光学显微镜。试剂：RPMI1640培养液、犊牛血清、青霉素（10*IU/mL）与链毒素（10*μg/mL)溶液、7.5%碳酸氢钠溶液等。 SN/T 1247—200细胞:猪原代肺泡巨噬细胞培养物(PAM)或 MARC-145或 HS2H 细胞。PAM 由无PRRS猪获取，并经批次检验合格，制备和检验方法参见附录C。MARC-145或HS2H 细胞由国家指定单位提供。5.1.2样品的采取和送检在发病早期，无菌采取病猪的血清或腹水。对病死猪(如流产的死胎)和扑杀猪(如弱胎猪）,应立即采取肺、扁桃体和脾等组织,置4℃保存，立即送实验室检疫。不能立即送检者，应置一30℃～一25℃冰箱中，或加50%甘油生理盐水，4℃保存送检。5.1.3样品的处理血清和腹水可直接使用。肺、脾和扁桃体等组织经处理后可单独使用，也可混合使用。各组织剪碎后研磨成糊状，加人RPMI1640培养液，制成10%悬液，3000×g离心15min，吸取上清液，加青霉素 500IU/mL、链霉素500μg/mL、庆大霉素 500 μg/mL和两性霉素 B200 μg/mL。怀疑有