SN_T 5123-2019进出口饲料组胺测定 比色法和酶联免疫吸附法.pdf

ICS 65.020.30B 42SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 5123—2019进出口饲料组胺测定比色法和酶联免疫吸附法Determination of histamine content in feeds for import and export-Colorimetric assay and enzyme immunoassay method2019-09-03 发布2020-03-01实施中国跟公中华人民共和国海关总署发布HG944440002711活树刮开涂层激活密码 SN/T 5123—2019前言本标准按照GB/T 1.1-—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福州海关、中华人民共和国东山海关、中华人民共和国天津海关。本标准主要起草人：王武军、陈艳、陈俊玉、郑腾、白泉阳、张体银、李富文、张志灯、于师宇、张玉燕、钱疆、林素洁、余晓薇。 SN/T 5123—2019进出口饲料组胺测定比色法和酶联免疫吸附法1范围本标准规定了进出口饲料（鱼、鱼粉)中组胺的微孔板比色法和酶联免疫吸附法。本标准适用于进出口饲料（鱼、鱼粉)中组胺含量的筛选检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3微孔板比色法3.1方法概述样品提取后，通过离子交换柱纯化分离组胺和杂质。分离纯化后的组胺经过衍生反应，加入显色剂，然后在波长450nm处测量吸光度值。显色剂的吸光度值和样品中组胺的浓度成正比。借助标准曲线可以获得被检测样品中组胺的含量。3.2设备、材料和试剂3.2.1天平：读数精度0.01g。3.2.2移液器。3.2.3酶标仪。3.2.4恒温培养箱。3.2.5离心管：50 mL、10 mL。3.2.6粉碎机。3.2.7离心机。3.2.8涡旋混合器。3.2.9振荡摇床。3.2.10水：符合GB/T6682中二级水的规格要求。3.2.11异丙醇和70%异丙醇溶液：分析纯。3.2.12标准物质：盐酸组胺(CsH。N：·2HCI,相对分子质量为184.07,纯度≥99%）。3.2.13组胺标准储备溶液1.0 mg/mL：称取盐酸组胺标准物质16.57mg于10mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度,得到组胺标准储备溶液 1.0 mg/mL，于 4℃保存,可使用 3个月。1 SN/T 5123-20193.2.14商品化试剂（RIDA QUICK Histamin）1)：包含离子交换柱，组胺标准品0 mg/kg、2.5 mg/kg5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg，96 孔微孔板，洗脱缓冲液，洗涤缓冲液，显色剂1和显色剂 2。3.3样品制备3.3.1饵料鱼样品用50mL蒸馏水对50.0g饵料鱼样品进行均质处理。如涉及饵料鱼冻片样品，待恢复室温后采样均质。称取1.0g均质后的样品加人到聚丙烯试管中，加人3mL异丙醇（100%），用涡旋混合器混合，室温 2000 r/min离心3 min,取1 mL上清液进步纯化。使用3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交换柱，加人1mL上清液于离子交换柱，令其缓慢流过离子交换柱，用1mL70%的异丙醇洗涤离子交换柱，分别使用3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交换柱两次，排除掉洗涤液，用新的试管收集组胺洗脱液；小心滴加0.5mL洗脱缓冲液，使其缓慢流人离子交换柱中，再加人0.5mL洗脱缓冲液；压人少量空气，得到全部洗脱液；用涡旋混合器混合洗脱液，取混合后的洗脱液200μuL用于显色反应。3.3.2饲料（鱼粉）样品称取2g研磨后的样品于合适容器中，加人20 mL70%异丙醇溶液，充分振荡4 min（人工或使用搅拌器），用滤纸过滤提取物，滤液离心或静置数分钟；取200uL滤液或上清液进行纯化。使用3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交换桂，加人200uL上清液于离子交换柱，分别使用3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交换柱两次，排除掉洗涤液，用新的试管收集组胺洗脱液。小心滴加0.5mL洗脱缓冲液，使其缓慢流人离子交换柱中，再加人0.5mL洗脱缓冲液。压人少量空气，得到全部洗脱液，用涡旋混合器混合洗脱液，取混合后的洗脱液200uL用于显色反应。3.4试验步骤3.4.1按比例1：2(1十1)混合显色剂1和显色剂2。3.4.2将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插人微孔板架，记录下标准品和样品的位置。3.4.3X对于标准品孔，每孔加人50uL标准品和150uL洗脱液。移取每份标准品时要更换枪头。3.4.4对于样品孔，每孔加人样品洗