检定用菌种的保存与传代标准操作规程.pdfVIP

ABC 有限公司 GMP 标准操作规程 编 码： 共 2 页 题 目 检定用菌种的保存与传代标准操作规程 第1页 制 定 审 核 批 准 制定日期 审核日期 批准日期 颁发部门 质量部 颁发数量 份 生效日期 分发部门 质量部、QC 修订原因 公司组织机构变更、重新修订文件 目 的：建立工作用菌种的保存与传代方法。 应用范围：适用于生物检定以确保检验结果准确。 责 任 人：QC、质量保证部经理。 内 容： 1 检定用菌悬液的接种。 1.1 微生物检定用的标准菌种，规定由中国药品生物制品检定所提供的冷冻干燥品（安 瓿）。 1.2 接种 1.2.1 准备妥冷冻菌种安瓿灭菌的毛细滴管双碟、镊子、注射器、肉汤培养基、灭菌水 及普通琼脂斜面移入接种室。 1.2.2 在接种室 （或超净台）按无菌操作要求操作。 1.2.3 用 75％酒精棉揩净菌种安瓿外壁，晾干。 1.2.4 用砂轮在安瓿上部 1/3 处划痕，用干燥的无菌纱布包裹安瓿，将安瓿掰开。 1.2.5 用一无菌吸管取适量0.5～0.8ml 的液体培养基滴加到安瓿中，轻轻放转安瓿并吹 打，使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解，再将安瓿内的菌悬液全部吸同，转移 至相应的培养基试管中。 1.2.6 根据菌种类型采用适宜培养条件下培养，细菌培养温度 30～35℃，18～24h；真菌 培养温度 23～28℃，3～5 天；观察培养基否浑浊 （如不浑浊，细菌应延长培养时间至 7 天以上，真菌应延长培养时间至 14 天以上，对于经培养仍未浑浊的培养基管，按检定菌 标准管理规程规定处理）。 1.3 菌种确认 用无菌接种环取上述培养物，在相应培养基平板上划线分离单个菌落，适宜 条件下培养，培养后观察是否具有典型的菌落形态，挑取单个纯菌落进行革兰染色和镜栓， 观察其染色特性及微生物形态学特征。对己通过确认鉴定后的菌种可以使用或传代保藏。 2 传代 2.1 左手持分离培养的平板培养基，右手持接种环，经火焰烧灼，冷却后在平板上挑取 编 码： 共 2 页 题 目 检定用菌种的保存与传代标准操作规程 第2页 菌落。 2.2 左手立即放下平板，换持斜面培养基，用右手小指和无名指拔出管塞，夹持于手指 之间。将管口在火焰上通过两三次，但勿烧烫。在迅速将挑取有菌的接种环伸进斜面内， 从斜面的底部向上划一条接种线，又自下而上蜿蜒接种成曲线。 2.3 退出接种环，塞上管塞。接种环经火焰灭菌后放置。 3 斜面低温保藏法 3.1 将待保藏菌种转接 2 支适宜的斜面培养基表面。在适宜温度培养适宜时间，待菌种 生长充分以后，把培养好的新鲜菌种管用牛皮纸包好，转移至4℃左右冰箱保存。供菌种 保存与传代用。。 3.2 1 支斜面培养物作为日常工作中使用的菌种，置于冰箱保存。1 支斜面培养基用于传 代，每月传代 1 次，每次传代 2 支，将新传代的培养物代替原有的菌种。 3.3 培养好的斜面，应仔细观察有无杂菌，可涂片镜检，或再移植适宜斜面培养基适宜 温度培养，检查有无杂菌，如有可疑即应废弃，重新取原始冷冻安瓿接种。 4 变更历史 版本 文件编号 生效日期 变更原因、依据及内容 0 1