SN_T 0973-2010进出口肉、肉制品及其他食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0973—2010代替SN/T0973—2000进出口肉、肉制品及其他食品中肠出血性大肠杆菌O157：H7检测方法Determination of entero-hemorrhagicE. coli O157:H7 in meats/meat product and other food for import and export2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国司发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 0973—2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T0973一2000《进出口肉及肉制品中肠出血性大肠杆菌O157：H7检测方法》。本标准与SN/T0973一2000相比，主要技术变化如下：补充了ELISA方法快速检测肠出血性大肠杆菌O157：H7的内容；补充了微生物遗传分子特征性鉴定技术（基因分型)内容，便于对该危害性致病菌的溯源性调查和变异性研究。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、3M中国有限公司、生物梅里埃（中国）公司。本标准主要起草人：张树宏、顾鸣、韩伟、杨捷琳、范放、吕敬章、万志刚、吕雷、朱贻华、刘毅。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T0973—2000。 SN/T0973—2010进出口肉、肉制品及其他食品中肠出血性大肠杆菌0157：H7检测方法1范围本标准规定了进出口肉及肉制品中肠出血性大肠杆菌O157：H7的检测方法。本标准适用于进出口肉、肉制品及其他食品中的肠出血性大肠杆菌O157：H7的定性检验。2定义和术语下列术语和定义适用于本文件。2. 17entero-hemorrhagicE.Coli 0157:H7肠出血性大肠杆菌0157:H7本细菌为需氧或兼性厌氧、革兰氏阴性，有周鞭毛，并有菌毛，不产生芽孢，发酵乳糖，不发酵或迟缓发酵山梨醇，氧化酶阴性，β葡萄糖苷酶阴性的杆菌。3方法原理采用Tecra微孔板法大肠杆菌O157：H7快速检测试剂盒方法1。样品增菌液煮沸裂解，裂解液与特异性抗体（一抗）包被的微孔板杂交后，用酶标抗体（二抗）再杂交，然后与特定底物反应生成有色化合物，利用肉眼或酶标仪进行检测。4设备和材料4.1恒温培养箱：（10℃~50℃）±1℃。4.2均质器：小于12000r/min。4.3高压灭菌锅。4.4科玛嘉大肠杆菌O157：H7显色琼脂平板²）。4.5VIDAS自动酶联免疫检测仪，法国梅利埃公司产品或其他等效产品3）。4.6VITEK自动微生物生化鉴定仪或其他等效产品3。4.7微生物实验室通用玻璃器血、移液管、玻血等。4.8铂或镍铬丝接种环，直径约3mm；玻璃L棒。1)、2）分别为由美国3M公司和法国科玛嘉公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品3）由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。1 SN/T0973—20104.9电子天平：精确值0.001g。4.10移液枪及枪头：1mL、0.2mL。4.11洗板机。4.12酶标仪（波长450nm）。5培养基和试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水（Tecra法试剂的配制使用重蒸水）。5.1改良E.C新生霉素增菌肉汤[m(EC)n]:见附录A中A.1。5.2山梨醇麦康凯琼脂（SMAC)：见附录A中A.2。5.3月桂基磷酸盐胰蛋白陈MUG肉汤（LST-MUG)：见附录A中A.3。5.4TecraTM微孔板法大肠杆菌O157快速检测试剂盒VIDAS或VIDASUPO157：H7测试条或其他等效产品。5.5含新生霉素的缓冲胰蛋白陈大豆肉汤(BTSB+N)：见附录A中A.4。5.6Imbentin补充液：见附录A中A.56试样制备与保存6.1制备从混合样品中取出代表性样品，将可食用部分（去掉可见脂肪）充分均质。用四分法所分出不少于500g作为试样，装人灭菌容器内，加封后标明标记6.2保存试样于一18℃以下冷冻保存。7检测流程检测流程见图1。2 SN/T0973—2010检样25g225mLm(EC)n肉汤41℃±1℃,18h~24h10-410-5、10-6三个稀释度0.1mL，分别涂布SMAELISA方法平板和科玛嘉显色琼脂平板，36℃士1℃下培养或VIDAS仪等18h～24h，每个平板挑5个～8个无色菌落快速筛选接种LST-MUG发酵管培养基，36℃±1℃下培养24h。挑产气且无荧光培养物转种普通