SC_T 7213-2011鮰嗜麦芽寡养单胞菌检测方法.pdf

ICS 65.150B 52SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7213—2011鲷嗜麦芽寡养单胞菌检测方法Detection methods for stenotrophomonas maltophilia from chanel fish2011-09-01 发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7213—2011前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本标准起草单位：中国水产科学研究院珠江水产研究所。本标准主要起草人：姜兰、赵飞、邹为民、谭爱萍、陆小、罗理、王伟利。I SC/T 7213—2011鲷嗜麦芽寡养单胞菌检测方法1 范围本标准规定了由嗜麦芽寡养单胞菌（stenotrophomonasmaltophilia）引起的细菌性病害的病原鉴定方法与结果判定。本标准适用于斑点叉尾（Ictalurus punctatus）和云斑（Ictalurus nebulosus）分离的嗜麦芽寡养单胞菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T18652--2002致病性嗜水气单胞菌检验方法SC/T7014--2006水生动物检疫实验技术规范3试剂、染色液与培养基检验中所需试剂、染色液与培养基的配制按GB/T4789.28、GB/T18652或SC/T7014执行；聚合酶链式反应（PCR)测定用水应符合GB/T6682中级水的规格，且要用焦炭酸二乙酯(DEPC)处理水（A.1），上述未提及的见附录A。16SrRNA序列扩增引物,P1:5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3,P2:5-GGTTACCTT-GTTACGACTT-3,一20℃保存。4设备和器械超净工作台、生物显微镜、PCR仪、电泳仪、微生物检测必备辅助设备和器械等。5细菌分离与培养5.1取样取鱼的肝、肾及病灶组织。从取样组织中直接分离接种；在无菌环境中将样品置于无菌离心管中，用无菌盐水冲洗并捣碎，然后分离接种。5.2分离培养样品接种在血液琼脂平板（按GB/T4789.28一2003中4.6规定的方法配制），按常规法划线。28℃培养24h～48h。然后，从中挑取黄、灰或淡黄色的单菌落在普通营养琼脂平板（按GB/T4789.28—2003中4.7规定的方法配制进行纯化培养。6革兰氏染色按GB/T4789.28-—2003中2.2的规定执行。1 SC/T 7213—20117生理生化试验7.1葡萄糖氧化发酵试验(O/F试验）按GB/T4789.28一2003中3.1的规定执行。若封口管与开口管的培养基均变黄色，为发酵型细菌，判断为阳性；否则为非发酵型菌，判断为阴性。7.2葡萄糖酸盐试验将待检菌接种于1%葡萄糖酸盐液体培养基中（配制方法见A.2、A.3），置28℃静置培养24h，加人裴林试剂0.5mL(配制方法见A.4)，于100℃水浴10min后迅速冷却，待观察。试管液体出现黄绿色、绿橙色或红色沉淀为阳性，不变色（仍为蓝色）为阴性。7.3肌醇发酵试验将待检菌穿刺接种于肌醇发酵试验培养基（配制方法见A.5），28℃培养，分别在24h、72h、120h时观察。培养基变黄色为阳性，不变黄色为阴性。7.4硫化氢(H2S)试验按GB/T4789.28--2003中3.14的规定执行。培养基变黑色为阳性，不变黑色为阴性。7.5吲哚试验按SC/T7014一2006中表2的吲哚（靛基质)试验的规定执行。培养基变红色为阳性，不变红色为阴性。7.6甲基红(M.R)试验按SC/T7014一2006中表2的甲基红（M.R)试验规定执行。培养基变红色为阳性，不变红色为阴性。7.7乙酰甲基甲醇(V-P)试验按SC/T7014一2006中表2的乙酰甲基甲醇(V-P)试验规定执行。培养基下层出现红色为阳性，不出现红色为阴性。7.8氧化酶试验以毛细管吸取四甲基对苯二胺的1%水溶液滴在细菌的菌落上。菌落呈玫瑰红色、深紫色为阳性，不变色为阴性。7.9过氧化氢酶（接触酶)试验按SC/T7014一2006中表2的接触酶试验的规定执行。有气泡产生为阳性，不产生气泡为阴性。7.10淀粉水解试验按SC/T7014一2006中表2的淀粉水解试验规定执行。菌落周围有透明环为阳性，无透明环为阴性。7.11液化明胶试验按GB/T4789.28一2003