胶体金免疫渗虑技术（免疫学检验课件）.pptx

金标记技术;金免疫技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的一种免疫标记技术。这一技术在70年代初期由Faulk和Taylor始创最初用于免疫电镜技术，属免疫组织化学技术。在免疫测定中金标记常与膜载体配合，形成特定的测定模式，典型的如斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等，已是目前应用广泛的简便、快速检验方法。;金免疫技术;胶体金： 金以微小粒子分散在溶液中所形成的金溶胶 用此金溶胶标记蛋白质，胶体金颗粒具有高 电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体 结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些 标记物在相应的标记处大量聚集时可在载体 膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点，从而 用于抗原或抗体物质的定位或定性。;胶体金的结构 ;胶体金的一般性状 1.胶体金的稳定性 微小、稳定地、均匀地、单一分散 2.胶体金（1-100nm）的颜色和光吸收性 最小 （2-5nm ） 橙黄色 中等大小（10-20nm ） 酒红色 较大颗粒 （30-80nm ） 紫红色;二、胶体金的制备方法 胶体金的鉴定 胶体金的保存 洁净的玻璃器皿;三、免疫金的制备 胶体金与抗原(抗体)的结合物称为免疫金又称金探针。 胶体金颗粒的负电荷与蛋白质的正电荷 影响因素：PH、离子强度、颗粒大小、蛋白质的分子量及浓度。 免疫金的制备方法 1.胶体金溶液的PH调整 2.蛋白质最适标记量的确定 3.标记过程 4.离心去除未结合的蛋白质;免疫金的保存 免疫金复合物最终用稀释液配制成工作浓度保存。稀释液通常是加入稳定剂的缓冲液。缓冲液常用中性的PBS或Tris缓冲液。PEG(聚乙二醇)和BSA（牛血清白蛋白）是常用的稳定剂。;第二节 斑点金免疫渗滤试验;技术要点 1.试剂盒组成 2.操作要点 ;技术类型 1.双抗体夹心法 2.间接法（非目的IgG的干扰）; 原理 以硝酸纤维素膜为载体，但利用了微孔膜的 毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢 向另一端渗移，犹如层析一般。 ;斑点金免疫层析试验操作示意图 ;技术类型 双抗体夹心法 竞争法 间接法 ;单克隆双抗体夹心法;双抗体夹心法;技术要点 1.试剂盒组成 胶体金层析条 2.操作要点 ①将试剂条标记线一端浸入待测标本中2-5秒 ②平放于水平桌面上 ③ 5-20分钟内观察结果 阴性 出现一条棕红线质控条 阳性 出现两条棕红线条带;三、临床应用及评价 操作简便、快捷、无需特殊仪器设备，试剂稳定、便于保存，符合“床边检验” 灵敏度不及酶标法和酶发光免疫测定法 不能准确定量，只能作为定性或半定量试验。 主要用于正常体液中不存在的物质和正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质