免疫原的制备（免疫学检验课件）.pptx

免疫原的制备; 抗原和抗体是免疫学检测中的两大基本因素，抗原的纯化是制备特异性抗体的先决条件，制得的抗体又可用于抗原的纯化和检测。 ;免疫原的制备; 一、细胞性免疫原的制备; 2.细菌抗原的制备 细菌抗原有菌体抗原和鞭毛抗原等，多选用典型菌株的液体或固体培养物经集菌后处理。鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理，而菌体抗原则需要在100℃加温2～2.5小时后应用。 ;蛋白质、酶、核酸、细菌毒素等皆为可溶性抗原，这些物质大多来源于人和动物的组织和细胞，要想获得此类抗原，通常要先破碎组织和细胞，再进一步提取和纯化。 ;制备流程; 可溶性抗原包括蛋白质、脂多糖、核酸等，多来源于人和动物的组织或细胞，需先将组织或细胞破碎，再提取和纯化，才能获得所需的可溶性抗原。;1.组织匀浆的制备 高速捣碎法或研磨法 2.细胞破碎的方法 （1） 反复冻融法 （2） 超声波破碎法 （3） 溶菌酶处理法 （4）表面活性剂处理法 ;3.可溶性抗原的提纯 方法： 超速离心法，选择性沉淀法， 凝胶过滤，离子交换层析， 亲和层析， 电泳法 ; 用化学合成法或基因重组法制备的抗原，称之为人工抗原，包括人工结合抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。; 半抗原不能直接做为免疫原，只有把这些半抗原和大分子物质结合后，才具有免疫原性。这种经过人工修饰的半抗原称之为人工结合抗原，用于偶联半抗原的大分子物质称为载体。 ;;人工结合免疫原的鉴定; 用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽，即人工合成抗原。 ; 将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体DNA分子相结合，然后引入受体细胞中（如大肠杆菌或酵母菌）使之表达，能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后可作为抗原，即基因工程抗原。 ;四、免疫佐剂; 在进行动物免疫时最常用的佐剂是福氏（Freund）佐剂，根据有无卡介苗又可分为福氏不完全佐剂和福氏完全佐剂。福氏不完全佐剂是由油剂和乳化剂制成，在福氏不完全佐剂中加入卡介苗就???了福氏完全佐剂。 ; 福氏佐剂和抗原的比例为1:1。由于福氏佐剂是油剂，加入抗原后要充分混合成乳剂。 ;注射器混合法;1.改变抗原的物理性状，延长抗原在体内的存留时间，从而有效地刺激免疫系统； 2.刺激单核-吞噬细胞系统，增强其抗原提呈能力； 3.可加强淋巴细胞的增殖分化，促进其对抗原的处理能力。