SN_T 4419.3-2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法 第3部分：胡桃.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4419.3—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第3部分：胡桃Food allergen detection with LAMP methods for export-Part 3: Walnut2016-10-01实施2016-03-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局查真伪 SN/T 4419.3--2016前言SN/T4419《出口食品常见过敏原I.AMP系列检测方法》由下列部分组成：第1部分：开心果；第2部分：腰果；一第3部分：胡桃；第 4 部分:榛果;第5部分：杏仁；一第6部分：扁桃仁；第7部分：巴西坚果;第8部分：澳洲坚果；第9部分：栗子；第10部分：大豆；第11部分：羽扇豆；?第12部分：花生；第13部分：葵花籽；第14部分：芝麻；第15部分：大麦；第16部分：小麦；第17部分：荞麦；第18部分：芥末；第19部分：胡萝卜；一一第 20部分：芹菜；第21部分：牛奶；第22部分：虾。本部分为SN/T4419的第3部分，本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、黄文胜、曹际娟、刘伟、韩建勋、曾静、张舒亚、刘津、高宏伟、吴亚君、李富威。 SN/T 4419.3—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第3部分：胡桃1范围SN/T4419的本部分规定了食品中过敏原胡桃、山核桃和长山核桃成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原胡桃、山核桃和长山核桃成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检测限（LOD)为0.5%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。‘凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T27403--2008实验室质量控制规范：食品分子生物学检测SN/T1961.6-2013出口食品过敏原成分检测第6.部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分3术语、定义和缩略语3.1 术语和定义下列术语和定义适用于本文件，3.1.1过敏原‧allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。3.1.2胡桃walnut也称核桃，又名波斯胡桃、英国胡桃。胡桃科胡桃属植物胡桃（Juglans regia）所产坚果，原产欧洲东南部及亚洲西部。3.1.3山核桃hickory胡桃科山核桃属植物山核桃(Carya cathayensis)所产坚果，原产于中国安徽、浙江等地。3.1.4长山核桃pecan又称美国山核桃、碧根果，属胡桃科山核桃属植物长山核桃(Carya illinoensis)所产坚果，原产于北美大陆中南部。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate) SN/T 4419.3--2016AMP环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification)Triton X-100聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403一2008中附录D的规定。5　方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用胡桃2S球蛋白基因特异性检测引物进行LAMP扩增，通过颜色变化观察判定是否存在过敏原胡桃、山核桃和长山核桃成分。6　LAMP检测方法6.1原理根据胡桃、山核桃和长山核桃2S种子贮存蛋白基因设计特异性内引物、外引物（和环引物)各一对，特异性识别靶序列上的6或8个独立区域。在链置换型DNA聚合酶的作用下，内引物与模板DNA退火、延伸，并利用外引物与模板DNA的退火延伸置换出内引物合成链。由于内引物与相邻区域存在互补区，游离的内引物合成链折叠成茎-环结构，以自身为模板，启动链置换扩增循环，合成长度不一的大量茎-环结构DNA。加人显色液，即可通过反应液的颜色变化观察判定结果。DNA聚合反应析出的焦磷酸根离子与溶液中的Mg²+结合，形成焦磷酸镁乳白色沉淀，故也可通过反应液的浊度变化观察判定结果。显色液显色原理：SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色荧光的染料。在游离状态下 SYBR Green I发出微弱的荧光，但一且与