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多鳞群体同工酶基因定位及遗传多样性分析 多鳞鱼属于慈姑属、慈姑属、慈姑属和慈姑属。 1 材料和方法 1.1 天然水域的测定 多鳞鱚群体分别取自广东湛江、阳江及北部湾等地天然水域,分别用ZJ、YJ、BBW来表示。试验用鱼均为体形完整的健康成鱼,每个群体随机取样40尾以上,体长范围10~18cm。 1.2 数据处理与分析 1.2.2同工酶电泳检测采用聚丙烯酰胺垂直板不连续 电泳法,分离胶和浓缩胶配制 方法见表1。 所分析酶的名称、缩写和编号摘自王中仁等 1.2.3数据处理与分析根据电泳结果判断每尾鱼每种同工酶的基因型,依据基因型计算每种同工酶的基因频率、多态基因座位数、多态基因座位比例、单位基因座位的等位基因数、平均实际杂合度、 平均预期杂合度,并对有变异的基因座位进行哈代温伯格平衡的x 2 结果与分析 2.1 rase酶系统 2.1.1乳酸脱氢酶多鳞鱚的乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase,LDH)LDH-A和LDH-B两个基因座位编码,形成5条四聚体 酶带A4、A3B、 A2B2、AB3和B4(图1)。 2.1.2酯酶从电泳图谱(图2)中可以看出,其酯酶(Esterase,EST)非常丰富。 2.1.3苹果酸脱 氢酶 (Malate dehydrogenate, MDH) 多鳞鱚检测到4条酶带,s-MDH的两个位点(s-MDH-A和s-MDH-B)编码2条酶带(图3),m-MDH的两个位点(m-MDH-C和m-MDH-D)编码2条酶带。 2.1.4苹果酸酶(Malicenzyme,ME)检测到由1个位点编码的2条酶带(图4)。 2.1.5山梨醇脱 氢酶 (Sorbitol dehydrogenase, SDH) SDH在多鳞鱚中有2个基因位点,SDH-1上有一个等位基因,SDH-2上有2个等位基因a,b (图5)。 2.1.6超氧化物歧化酶多鳞鱚的超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)Sod-1和Sod-2两位点编码,Sod-1位点上均只有1个等位基因,Sod2位点上有2个等位基因分别为a,b(图6)。 2.23 种群遗传多样性 6种同工酶共记录的16个基因座位,其中SOD、 SDH、LDH共3个位点是多态的。测得基因座位及其等位基因频率见表3,各群体平均期望杂合度、实际杂合度、平均等位基因数目、平均有效等位基因数见表4。湛江群体的多态座位比例P为13%,群体平均杂合度He为0.023;平均杂合 度预期值Ho为0.003;Hardy-Weinberg遗传偏离指数为-0.870;位点有效等位基因数为1.05;阳江群体的多态座位比例P为19%,群体平均杂合度He为0.093;平均杂合度预期值Ho为0.167;Hardy-Weinberg遗传偏离指数为0.903;位点有效等位基因数为1.17;北部湾群体的多态座位比例P为13%,群体平均杂合度He为0.021;平均杂合度预期值Ho为0.003;Hardy-Weinberg遗传偏离指数为-0.857;位点有效等位基因数为1.03。3个群体平均有效等位基因数目1.083,平均实际杂合度0.058,平均期望杂合度0.046,平均遗传偏离指数-0.275。 2.3 群体间的遗传距离 根据Nei’s遗传一致性和遗传距离对分析的3个不同群体进行聚类分析。图7显示,ZJ与BBW群体最为接近,YZ群体则成 为相对独 立的一支。 群体间的遗传距离(见表5)表明,湛江群体与北部湾群体遗传距离最小(0.001),说明湛江群体与北部湾群体间的遗传分化较小;而阳江群体与北部湾群体遗传距离最大。 3 同工酶遗传检测 此研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对阳江、 湛江和北部湾3个多鳞鱚群体的6种同工酶进行了分析,发现6种同工酶共记录的16个基因座位,其中SOD、SDH、LDH共3个位点是多态的。聚类分析结果发现湛江群体与北部湾群体遗传距离最小 (0.001),说明湛江群体与北部湾群体间的遗传分化较小;而阳江群体与北部湾群体遗传距离最大。 Hardy-Weinberg遗传偏离指数(D)值 平均杂合度是评估鱼类种群遗传变异最简单直接、最富信息的参数。与已报道的其他鱼类的同工酶遗传变异相比较 同工酶电泳作为群体遗传学的一个研究方法, 能够有效的检测出种群丰富的多态,其共显性遗传的特点,可以有效地度量遗传变异的群体结构。同工酶作为一种生化指标,虽然也已广泛应用于物种及杂种鉴定、物种倍性鉴定、物种间亲缘关系比较及系统分类、基因连锁分析及基因作图、基因的重复与演化、胚胎发育过程中的基因表达与调控、杂交育种以及种群遗传结构分析等理论研究和实际应用领域,但它仍存在不少问题。目前,很多学者都已经认识到,同工酶的生化遗传分析只是分析比较不同基因型的产物,而不是遗传密码基因本身,且不能分析非结