SNT 1135.8-2009马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1135.8—2009马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法Quarantine identification of Phoma exigua var. foveata2009-09-02发布2010-03-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法SN/T 1135. 8—2009*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www.spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16印张0.5　字数７千字2009年12月第一版　2009年12月第一次印刷印数 1—2000*书号：155066·2-20145 SN/T 1135.8-2009言前本标准的附录 A、附录 B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：刘伟、王秀芬、于恒纯、王有福、姜丽、彭金火。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1135.8--2009马铃薯坏疽病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了马铃薯坏疽病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于所有进境马铃薯薯块携带的马铃薯坏疽病菌的检疫鉴定。2原理2.1分类地位马铃薯坏疽病菌（Phoma ecigua var.foveata）的分类为真菌界Fungi，无性型真菌Anamorphicfungi,孔穴茎点霉。2.2寄主主要寄主为马铃薯。在安第斯山地区还危害昆诺藜（Chenopodium quinoa）和野生马铃薯。2.3鉴定原理该病原菌的危害症状、分离培养特性以及形态特征是检疫鉴定的主要依据。3仪器设备、用具及试剂3.1仪器设备及用具电子天平（感量1/10000g）、解剖镜、显微镜、超净工作台、温控培养箱、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、镊子、量筒、培养皿等。3.2 试剂无水乙醇、次氯酸钠、氨水、麦芽糖琼脂培养基(参见附录A)等。4检验方法4.1 症状观察观察马铃薯薯块是否有病斑及菌丝线、分生孢子器等。4.2分离培养取有马铃薯坏疽病可疑症状的薯块,切开并在其病健交界处取样,切成 4 mm×4 mm 小块,0.5%的次氯酸钠表面消毒5 min，无菌水冲洗三遍，置于 2%（质量浓度)麦芽琼脂培养基（MA)平板上，每Ⅲ放置5块～6块;或在无菌状态下直接挑取菌丝置于2%麦芽琼脂培养基上，20℃～22℃黑暗条件下培养。4.3病原菌形态及特性观察观察马铃薯坏疽病菌的器孢子大小、形态及菌落特性。5鉴定特征5. 1 症状马铃薯坏疽病菌在马铃薯块茎上的症状为暗色凹陷小病斑，常不超过拇指大小。病斑皱缩容易剥离，留下一个干空腔。干空腔常扩展,产生带有灰色或暗褐色到紫色的菌丝线,并产生分生孢子器。小茎点霉变种（P.erigua var.eigua)在马铃薯薯块上可产生与马铃薯坏疽病菌相同的症状，该菌为弱寄生菌，可以用培养特征进行区别。由 Fusarium spp.引起的干腐病通常产生比较平整的同心轮纹病斑，病斑表面经常可见白色、粉白1 SN/T 1135.8—2009色或蓝紫色的真菌垫。5.2形态特征马铃薯坏疽病菌的器孢子在大小和形态上是变化的，但通常是单胞、卵形、透明;大小为 4 um~6.5 μmX2 μm~3 μm。5.3培养特征用 2%麦芽琼脂培养基 20 ℃～22℃黑暗恒温培养。3d后,马铃薯坏疽病菌（P.erigua var.fove-ata)产生灰白色的垫状菌落，此后多数菌落的中心从苍白色变为微黄褐色，菌落边缘规则。10 d后产生特有的、可扩散的葱醒色素。在酸性条件下,葱醌色素呈黄色，在碱性条件下呈红色（如将培养物暴露在挥发性的氨水上部，几秒钟后培养物即可变成红色）。cigua)与马铃薯坏疽病菌易于区在 2%麦芽琼脂培养基上培养时小茎点霉变种(Prigua别:P.ecigua var.foveata 的菌落呈放射状色苍白至微黄,有可护散性的葱醒色素产生；P.eriguavar.eigua的菌落呈同心轮纹（参见附录B)颜色为橄榄灰色到白色不产生可扩散性的葱醌色素。当小茎点霉变种 P.erigua var-eeigua-和马鈴薯坏疽病菌接种谨同一平板麦芽培养基时，在菌落的交界处会产生一个紫罗兰线。在生长于麦芽培养基中心的,Preaigua var.erigua 周围接种待鉴定菌，经培养后如果在两菌交界处产生紫罗兰线，可判定马铃薯坏疽病菌的存在。结果判定6符合 5.1 的症状、5.2形态以 5.3培养鉴定特性则判定该病菌为马铃薯坏疽病菌。7样品保存7.1菌种保存种到斜面培养基上，置于