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转基因技术及其在植物育种中的应用 一、概述 从 70 年代重组 DNA 技术创建 ，到 1983 年第一株转基因 烟草获得以来，国际上对转基因作物就存在着截然不同的观点： 接受？抵制？随着技术日趋成熟，转基因作物由实验室进人大田 中试，不少作物已向商品化发展。与此同时，转基因作物的生态 风险 ，可能带来的环境问题、转基因产品作为食品对人体健康问 题、产品贴标签问题、运输问题、国际贸易问题、知识产权问题 等已引起世界性的所谓“生物安全”的论战。转基因技术实际上 已由学术观点分歧，发展到知识产权问题、环境问题、经济问题 甚至政治问题 二、什么是转基因技术 转基因技术是将人工分离与修饰过 的基因导入到生物体基 因组中，由于导入基因的表达 ，引起生物体的性状 的可遗传 的修 饰 ，这一技术称之为转基因技术 （Transgene technology ）。又 名遗传工程、基因工程、遗传转化。 三、几种常用 的植物转基因方法 遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养、再 生植 株可分成两大类 ，第一类需要通过组织培养再 生植株，常用 的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类方法不需要 第 1 页 通过组织培养，目前比较成熟的主要有花粉管通道法，花粉 管通道法是中国科学家提出的。 1．农杆菌介导转化法 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌， 它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部 位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌与发根农杆菌 中细胞中分别含有 Ti 质粒与 Ri 质粒，其上有一段 T-DNA ， 农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将 T-DNA 插入到植 物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。 人们将目的基因插入到经过改造的 T-DNA 区，借助农杆菌的 感染实现外源基因 向植物细胞的转移与整合 ，然后通过细胞 与组织培养技术 ，再 生出转基因植株 。 农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，自从技术瓶 颈被打破之后，农杆菌介导转化在单子叶植物中也得到 了广 泛应用 ，其中水稻已经被当作模式植物进行研究 。 2 ．花粉管通道法 在授粉后 向子房注射含目的基因的 DNA 溶液 ，利用 植物在开花、受精过程 中形成的花粉管通道，将外源 DNA 导 入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中， 随着受精卵 的发育而成为带转基因的新个体。该方法于 80 年代初期由 中国学者周光宇提出，中国目前推广面积最大的 转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育 出来 的。该法的最大 第 2 页 优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装 备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。 3. 基因枪法 利用火药爆炸或高压气体加速（这一加速设备被称为基 因枪），将包裹了带目的基因的 DNA 溶液的高速微弹直接送 入完整的植物组织与细胞中，然后通过细胞与组织培养技术， 再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与 农杆菌转化相比，基因枪法转化的一个主要优点是不受受体 植物范围的限制。而且其载体质粒的构建也相对简单，因此 也是目前转基因研究中应用较为广泛 的一种方法。 四、转基因植株的检测 标记基因(包括选择标记基因及报告基因)用于帮助在植物遗 传转化中筛选与鉴定转化的细胞、组织与再生植株。在选择压力 下，不含标记基因及其产物的非转化细胞与组织死亡 ，转化细胞 由于有抗性，可继续成活、分裂并分化成植株。选择标记基因包 括抗生素抗性基因及除草剂抗性基因等，其中用得最多的是抗生 素抗性标记基因。报告基因包括 葡糖醛酸苷酶(gus)、荧光素酶 (1uc)、氯霉素乙酰转移酶(cat)、以及绿色荧光蛋白(gfp)基因等。 标记基因通常与目的基因构建在同一植物表达载体上，一起转人 植物，但标记基因本身有时也可作为目的基因，如除草剂抗性基 因提供除草荆抗性。 （一）报告基因的捡测 第 3 页 报告基因是具有明显区别于受体细胞遗传背景的选择标记， 因而易于进行转化后的筛选。利用酶法分析、通过同位索放射性 自显影技术及底物的颜