SN_T 3589.5-2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法 第5部分：黄鱼成分检测 实时荧光PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3589.5---2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第5部分：黄鱼成分检测实时荧光PCR法Identification of fish species in export food-Part 5 : Detection of yellow croaker ingredient-Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T 3589.52013前言SN/T3589《出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法》共分为7部分：第1部分：石斑鱼成分检测实时荧光PCR法；一—第2部分：安康鱼成分检测实时荧光PCR法；第3部分：鲑鱼成分检测实时荧光PCR法；1第4部分：河豚鱼成分检测实时荧光PCR法；第5部分：黄鱼成分检测实时荧光PCR法；1--第6部分：金枪鱼成分检测　实时荧光PCR法;一第7部分：鳕鱼成分检测实时荧光 PCR法。本部分为SN/T3589的第5部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、辽宁大学。本部分主要起草人：王芳、王秋雨、郑秋月、王金玲、徐君怡、齐震玉、赵昕、陈颖。1 SN/T 3589.5—2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第5部分：黄鱼成分检测实时荧光PCR法1范围SN/T3589的本部分规定了出白食品中黄鱼成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品中黄鱼，包括大黄鱼（Pseudosciaena crocea）和小黄鱼（Psendosciaenapolyactis)及其制品鉴伪的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1黄鱼 Pseudosciaena黄鱼分为大黄鱼和小黄鱼两种；隶属鱼纲;硬骨鱼亚纲，鲈形自，石首鱼科，黄鱼属，分别为我国四大海洋业品种之-。大黄鱼分布于黄海南部、东海和南海，小黄鱼分布于我国黄海、渤海、东海及朝鲜西海岸。3.2实时荧光 PCR real-time PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团,利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.3Ct 值 cycle threshold value每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4缩略语DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris:三（羟甲基)氨基甲烷[tris（hydroxymethyl）aminomethane] SN/T 3589.5—2013EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)Taq :水生栖热菌(（Thermus aquaticu)OD:光密度值(optical density)5方法提要提取样品DNA，以DNA为模板，分别采用黄鱼品种的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，进行食品中黄鱼及其制品的鉴伪检测。6仪器和设备6.1实时荧光PCR仪。6.2离心机：离心转速≥12 000 r/min。6.3微量移液器:10 μL、100 μL、200 μL、1 000 μL。6.47冰箱:2℃～8℃,20℃。6.5高压灭菌器。6.6核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。6.7 pH计。6.8天平:感量 0.01 g。7试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。7.1检测用引物(对)序列和探针：黄鱼成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表1试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因内参照5端引物TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照3端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT真核生物18SrRNA基因内参照探针FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC-TAMRA大黄鱼5端引物ACCTCAACTCTCTGGGTAAGG大黄鱼3端引物TCAAACCCTTCGCCTT