SN_T 4419.19-2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法 第19部分：胡萝卜.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4419.19—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第19部分：胡萝←Food allergen detection with LAMP methods for export-Part 19 :Carrot2016-03-09 发布2016-10-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局Soois全 SN/T 4419.19—2016前言SN/T4419《出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法》由下列部分组成：第1部分：开心果；第2部分：腰果；第3部分：胡桃；第4部分：榛果；第5部分：杏仁；第6部分：扁桃仁；第7部分：巴西坚果；第8部分：澳洲坚果；第9部分：栗子；第10部分：大豆；第11部分：羽扇豆；第12部分：花生；第13部分：葵花籽；第14部分：芝麻；一第15部分：大麦；第16部分：小麦；第17部分：荞麦；第18部分：芥末；-第19部分胡萝卜；第20部分：芹菜；-第21部分：牛奶;第22部分：虾。本部分为SN/T4419的第19部分。本部分按照GB/T 1.1一-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局入本部分主要起草人：孙敏、高宏伟、刘彩霞、张舒亚、黄文胜、陈颖、韩建勋、邓婷婷、吴亚君。1 SN/T 4419.19—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第19部分：胡萝卜1 范围SN/T 4419的本部分规定了出口食品中过敏原胡萝卜成分的环介导等温扩增（LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原胡萝卜成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检测限（LOD)为0.1%（质量分数）。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T1961.7—2013出口食品过敏原成分检测第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。3.1.2胡萝卜carrot别名：胡芦，红萝卜，又称甘荀，,属伞形科（Apiaceae)胡萝卜属（Daucus L.）。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)LAMP:环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification)Triton X-100:聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403一2008中附录D的规定。５　方法提要样品经研磨后,提取 DNA，以DNA 为模板，采用胡萝卜 ITS1-5.8SRNA-ITS2基因特异性检测引 SN/T 4419.19—2016物进行LAMP扩增，通过颜色变化观察判定是否存在过敏原胡萝卜成分。6LAMP检测方法6.1原理根据胡萝卜 ITS1-5.8SRNA-ITS2基因序列设计特异性内引物、外引物和环引物各一对，特异性识别靶序列上的8个独立区域。在链置换型 DNA聚合酶的作用下，内引物与模板 DNA退火、延伸,并利用外引物与模板DNA的退火延伸置换出内引物合成链。由于内引物与相邻区域存在互补区，游离的内引物合成链折叠成茎-环结构，以自身为模板，启动链置换扩增循环，合成长度不一的大量茎-环结构DNA。加人显色液，即可通过反应液的颜色变化观察判定结果。DNA聚合反应析出的焦磷酸根离子与溶液中的 Mg²+结合，形成焦磷酸镁乳白色沉淀,故也可通过反应液的浊度变化观察判定结果。显色液显色原理：SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色荧光的染料。在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光，但一且与 dsDNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I荧光的强度与 dsDNA 的量正相关，可以根据 LAMP反应液的荧光强度测定反应体系中的dsDNA的量。6.2仪器和设备6.2.1水浴锅或加热模板：65℃±1℃和80℃±1℃。6.2.2离心管:0.1 mL、1.5 mL。6.2.3计时器。6.2.4 移液枪:量程 0.5μL～10 μL、量程 10 μL～100 μL、量程 100 μL～1 000 μL。6.3试剂和材