NY_T 3322-2018饲料中柠檬黄等7种水溶性色素的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3322—2018饲料中柠檬黄等7种水溶性色素的测定高效液相色谱法Determination of tartrazine 7 kinds of water-soluble pigment in feeds-High performance liquid chromatography2018-12-19 发布2019-06-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3322—2018前創言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草-本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所。本标准主要起草人：吴宁鹏、孟蕾、宋志超、陈小鸽、宋善道、舒畅、刘素梅、巩丹、邱天宝、周小娟、于辉、陈少渠。I NY/T 3322—2018饲料中柠檬黄等7种水溶性色素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中柠檬黄、苋菜红、脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红7种水溶性色素含量的液相色谱测定方法。本标准适用于食品动物配合饲料和浓缩饲料、宠物饲料、观赏鱼饲料中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红7种水溶性色素的测定。本标准亮蓝的检出限为0.25mg/kg，定量限为0.5mg/kg；柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红的检出限为0.5mg/kg，定量限为1.0mg/kg；靛蓝的检出限为1.0mg/kg，定量限为2.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理用碱性乙丙二醇水溶液提取试样中的待测物，提取液稀释后调pH，弱阴离子交换固相萃取柱净化，高效液相色谱测定，外标法定量。4试剂或材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯；水为GB/T6682规定的二级水。4.1柠檬黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红标准品或对照品，含量均不低于95.0%。4.2甲醇：色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4甲酸：含量不低于88%。4.5乙酸铵溶液（0.02mol/L，pH为5.0）：称取乙酸铵0.778g，用水溶解并稀释至500mL，混匀，用乙酸调节pH至5.0。4.6提取液：取乙腈250mL、丙二醇50mL、水190mL、氨水10mL，混匀。4.72%甲酸溶液：取甲酸2mL，用水稀释至100mL。4.81%甲酸溶液：取甲酸1mL,用水稀释至100mL。4.9甲酸甲醇溶液：取甲醇80mL，用1%甲酸溶液（4.8)稀释至100mL。4.1010%氨化甲醇溶液：取氨水10mL，用甲醇稀释至100mL。4.11标准储备液（1mg/mL）：分别精密称取柠檬黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝、日落黄、诱惑红（4.1)对照品约10mg（准确至0.01mg），置10mL棕色容量瓶中，用水稀释并定容，分别配制成1mg/mL的标准储备液。0℃～4℃避光保存，有效期为6个月；靛蓝标准储备液于0℃～4℃避光保存，有效期为1个月。4.12混合标准中间液(100μg/mL)：分别准确移取标准储备液（4.11)各1mL,置10mL容量瓶中，用1 NY/T 3322—2018水稀释至刻度，混匀。配制成100μg/mL的混合标准中间液。0℃～4℃下避光保存，有效期为1周。4.13弱阴离子交换固相萃取柱（WAX)：含亲水基团的聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物上键合哌嗪基团，500mg/6mL，或性能相当的萃取柱，4.14微孔滤膜（0.45μum）：尼龙滤膜或性能相当者。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器或者可变多波长紫外可见检测器。5.2分析天平：感量0.01mg。5.3天平：感量0.001g。5.4离心机：转速不低于10000r/min。5.5振荡器。5.6涡旋振荡器。5.7超声波清洗器。5.8固相萃取装置。5.9氮吹仪。5.10酸度计。6样品按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195制备样品，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中，备用。7试验步骤7.1提取称取试样约2g（精确至0.001g）于50mL离心管中，准确加入提取液（4.6)20mL，涡旋混合后，振荡10min，水浴超声提取10min。10000r/min离心10min，移取上清液至另一离心管中。残渣准确加人提取液20mL重复提取，合并上清液。准确移取上清液10mL于另一离心管中，加入水20mL，用甲酸调至pH(2.0士0.2），混匀后，10