SN 0973-2000进出口肉及肉制品中肠出血性大肠杆菌0157∶H7检验方法.pdf

SN中华人民共和国出人境检验检疫行业标准SN/T 0973—2000进出口肉及肉制品中肠出血性大肠杆菌 0157：H7 检验方法Method for the determination of entero-hemorrhagic E. coliO157 : H7 in meats and meat products for import and export2000-12-31实施2000-09-15 发布中华人民共和国国家出人境检验检疫局发布 SN/T 0973—2000前言本标准是按照GB/T1.1-1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》的要求编写的。其中对于肠出血性大肠杆菌O157：H7的增菌培养基、培养温度、分离琼脂、生化确认和快速筛选等方法是参考美国FDA《细菌分析手册》1995（第8版）以及日本厚生省和法国的检验标准及有关文献资料，结合我国国情，进行实践研究，并通过试验和验证后，按规定格式制定。本标准的附录A是标准的附录。本标准由中华人民共和国国家出入境检验检疫局提出并归口。本标准由中华人民共和国上海出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：吴仲梁、陶军、张树宏。本标准系首次发布的行业标准。 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口肉及肉制品中肠出血性SN/T 0973—2000大肠杆菌 0157：H7 检验方法Method for the determination of entero-hemorrhagicE. coli O157 : H7 in meats and meat products for import and export范围本标准规定了进出口肉及肉制品中肠出血性大肠杆菌O157：H7的检验方法。本标准适用于进出口猪、牛、禽肉及其制品中的肠出血性大肠杆菌0157：H7的检验。2．引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SN0330—1994出口食品中微生物学检验通则3定义本标准采用下列定义。3.1肠出血性大肠杆菌O157:H7entero-hemorrhagic E.coli O157：H7本细菌为需氧或兼性厌氧、革兰氏阴性，有周鞭毛，并有菌毛，不产生芽胞的杆菌。发酵乳糖，不发酵或迟缓发酵山梨醇。氧化酶阴性。MUG阴性。3.2符号m(EC)n改良E.C新生霉素增菌肉汤SMC山梨醇麦康凯琼脂LST-MUG肉汤月桂基磷酸盐胰蛋白陈MUG肉汤miniVIDAS小型自动酶联免疫荧光仪E:coli O157:H7 Latex Test E.coli O157:H7乳胶凝集试剂盒4抽样4:1抽样数量及抽样方法按SN0330进行4.2试样制备从混合样品中取出代表性样品，将可食部分（去掉可见脂肪)充分混匀。用四分法缩分出不少于500g作为试样，装入灭菌容器内，加封后标明标记。4.3试样保存将试样于一18℃以下冷冻保存。中华人民共和国国家出人境检验检疫局2000-09-15批准2000-12-31实施1 SN/T 0973—20005测定方法5.1方法提要将25g试样放入m(EC)n增菌肉汤41℃土1℃培养18h～24h。然后再将此增菌液以不同的稀释度分别接种到山梨醇麦康凯平板，36℃士1℃培养18h～24h。然后挑取不发酵山梨醇的可疑菌落作生化及血清学鉴定。此外，也可以上述增菌液用mini-VIDAS作检测45min即可获结果。此方法可作快速筛选。5.2设备和材料5.2.1恒温培养箱：(10℃～50℃）±1℃。5.2.2均质器：小于12000r/min附均质杯。5.2.3·高压灭菌锅。5.2.4mini-VIDAS法国梅利埃公司生产，或相当产品。5.2.5微生物实验室通用玻璃器血、移液管、玻血等。5.2.6铂铱或镍铬丝接种环，直径约3mm；玻璃L棒。5.3培养基和试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。5.3.1m(EC)n增菌肉汤（配方见附录A)。5.3.2SMAC分离琼脂平板（配方见附录A）。5.3.30.1%MUG的LST肉汤（配方见附录A）。5.3.4VIDAS测试条（由厂方提供）。5.3.5EHECO157：H7标准质控菌种，菌号：ATCC43889。5.3.6O157：H7标准血清（由上海市卫生防疫站提供）或相当产品。5.3.7乳凝试剂O157：H7诊断试剂盒（美国Remel公司提供)或相当者。5.4试样制备与测定步骤无菌操作称取试样25g放入500mL均质杯中，先加入少量m(EC)n增菌肉汤以8000r/min均质2min，再加入余下的m(EC)n增菌肉汤总量为225mL，加盖后置41℃±1℃培养18h～24