2023年甘肃中药酒乌梢蛇配方颗粒.pdfVIP

酒乌梢蛇配方颗粒 Jiuwushaoshe Peifangkeli 【来源】 本品为游蛇科动物乌梢蛇 Zaocys dhumnades （Cantor ）的干燥体经炮制加工 并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。 【制法】 取酒乌梢蛇饮片 3500g ，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏（干浸膏出膏率 为 14.5%~23% ），加入辅料适量，干燥（或干燥，粉碎），再加入辅料适量，混匀，制粒， 制成1000g，即得。 【性状】 本品为浅黄色至棕黄色的颗粒；气腥，味淡。 【鉴别】 （1）取本品0.5g ，研细，加甲醇10ml，超声处理30 分钟，滤过，作为供试 品溶液。取乌梢蛇对照药材 1.0g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2020 年版通则0502 ）试验，吸取供试品溶液2µl、对照药材溶液8µl ，分别点于同一硅胶G 薄层 板上，以正丁醇- 乙醇-冰醋酸-水（4 ∶1 ∶1 ∶0.2 ）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三 酮试液，在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。 （2 ）聚合酶链式反应法 模板DNA 提取 取本品1g，充分研磨使成粉末，取100mg，置2.0ml 离心管中，加入 CTAB 沉淀液[2%十六烷基三甲基溴化铵，100mmol/l Tris-盐酸pH=8.0 ，20mmol/l 乙二胺四 乙酸二钠pH=8.0]1.2ml ，涡旋震荡，65℃水浴加热1 小时（中间震荡混匀2~3 次），离心（转 速为每分钟 12000 转）5 分钟，弃去上清液；再加入CTAB 沉淀液 1.2ml ，涡旋震荡，65℃ 水浴加热30 分钟（中间震荡混匀2~3 次），离心（转速为每分钟12000 转）5 分钟，弃去上 清液，加入CTAB 提取液[2%十六烷基三甲基溴化铵，100mmol/l Tris-盐酸pH=8.0 ，20mmol/l 乙二胺四乙酸二钠pH=8.0 ，2.5mol/l 氯化钠，2%PVP40]1.2ml、蛋白酶K （20mg/ml ）10μl 和β-巯基乙醇10μl ，涡旋震荡混匀，56℃水浴加热过夜（中间翻转混匀3~5 次），取出，离 心（转速为每分钟12000 转）10 分钟，吸取上清液置另一2.0ml 离心管中，加入三氯甲烷- 异戊醇（体积比24 ∶1）溶液（约800μl ），充分混匀，4℃离心（转速为每分钟 12000 转） 10 分钟；吸取上清液置另一2.0ml 离心管中，加入等体积的三氯甲烷-异戊醇（体积比24 ∶1） 溶液（约900μl ），充分混匀，4℃离心（转速为每分钟12000 转）10 分钟；吸取上清液，加 入等体积的三氯甲烷-异戊醇（体积比24 ∶1）溶液（约800μl ），充分混匀，4℃离心（转速 为每分钟 12000 转）10 分钟；吸取上清液置另一 1.5ml 离心管中，加入等体积异丙醇（约 500μl ），在零下20℃静置60~90 分钟；离心（转速为每分钟 12000 转）5 分钟，弃上清液； 沉淀用75% 乙醇700μl 震荡1 分钟，离心（转速为每分钟12000 转）3 分钟，弃上清液；再 同法操作两次；沉淀再用无水乙醇700μl 震荡1 分钟，离心（转速为每分钟12000 转）3 分 钟，弃上清液；置37℃下金属浴挥干溶剂，加灭菌水50µl 使溶解，作为供试品溶液，置4℃ 保存或置零下20℃长期保存。 另取乌梢蛇对照药材适量，充分研磨使成细粉，取100mg，置2.0ml 离心管中，加入消 化液[细胞核裂解液200μl ，0.5mol/l 乙二胺四醋酸二钠溶液50μl ，蛋白酶K （20mg/ml ）20μl ， RNA 酶溶液5μl]275μl ，在56℃水浴加热2 小时，加入裂解缓冲液250μl，混匀，加到DNA 纯化柱中，离心（转速为每分钟10000 转）3 分钟；弃去过滤液，加入洗脱液[5mol/l 醋酸钾 溶液26μl ，1mol/l Tris-盐酸溶液（pH=7.5 ）18μl ，0.5mol/l 乙二胺四醋酸二钠溶液（pH=8.0 ） 3μl ，无水乙醇480μl ，灭菌双蒸水273μl]800μl，离心（转速为每分钟10000 转）1 分钟；弃 去过滤液，用上述洗脱液反复洗脱3 次，每次离心（转速为每分钟10000 转）1 分钟；弃去 过滤液，再