NY 570-2002马流产沙门氏菌病诊断技术.pdf

ICS 11. 220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 570 -- 2002马流产沙门氏菌病诊断技术Diagnostic techniques for equine abortus salmonellosis2002-08-27 发布2002-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 570-2002前 言马流产沙门氏菌病(equine abortus salmonellosis)是由沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌等引起的一种以孕马流产为主要特征的马属动物传染病，又名马副伤寒或马沙门氏菌性流产。幼驹感染后表现腹泻、关节肿大、支气管炎或败血症，公马、公驴表现睾丸炎、馨甲肿，在成年马中偶尔发生急性败血性胃肠炎。马流产沙门氏菌病在世界动物卫生组织［World Organization for Animal Health（英）,Office In-ternational des Epizooties（法）,OIE编著的《哺乳动物、禽和蜜蜂A类和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》中虽未单列本病,但在沙门氏菌病一章中规定了诊断试验方法。本标准与上述手册中沙门氏菌病的主要诊断技术病原鉴定和血清学试验基本一致。本标准的附录 A为资料性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国人民解放军军需大学。本标准主要起草人：王世若、王兴龙、沈广、梁焕春、江文正。 NY/T 570—2002马流产沙门氏菌病诊断技术1范围本标准规定了马流产沙门氏菌病的病原学检查及血清学检查的技术要求。本标准适用于马属动物马流产沙门氏菌病的诊断及检疫。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 4789.28一1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3细菌学检查3.1器材恒温箱、高压灭菌器、显微镜、灭菌试管、5mL灭菌注射器、煮沸消毒器、外科剪、棉棒、镊、载玻片、铂金耳、酒精灯等。3.2培养基及试剂3.2.1四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)，见GB4789.28—1994中4.14,4.15。3.2.2沙门-志贺(SS)琼脂，见GB4789.28—1994中4.22。3.2.3月尿素琼脂，见GB4789.28--1994中 3.15。3.2.4糖发酵管，见GB4789.28-1994中3.2。3.2.5蛋白陈水及靛基质试剂，见GB4789.28—1994中3.13。3.2.6缓冲葡萄糖蛋白陈水、甲基红(MR)试剂及维培(VP)试剂，见GB4789.28一1994中3.4。3.2.7三糖铁琼脂(TSI),见GB4789.28—1994中4.26,4.27。3.2.8革兰氏染色液，见GB4789.28—1994中2.2。3.2.9沙门氏菌属因子血清（26种，分型用）。3.2.10昆明系小鼠，清洁级，体重17g～20 g。3.3检验程序马流产沙门氏菌检验流程见附录A（资料性附录）。3.3.1病料标本采集3.3.1.1孕马流产胎儿，用外科剪无菌打开腹腔，用注射器吸取腹水或胃内容物注人灭菌试管中；或用外科剪取肝、脾、肾、心等置培养皿中。3.3.1.2流产母马胎衣，用灭菌棉棒蘸取黏液或刮取胎衣病变组织置于试管中。3.3.1.3公畜精液应于采精后，立即用注射器等吸取，注人试管中。3.3.1.4幼驹关节病变局部用碘酒及酒精消毒后，以注射器吸取关节液或肿胀部渗出液，注人试管中待检。3.3.2显微镜检查3.3.2.1操作方法将病料标本涂于载玻片上，革兰氏染色，镜检。1 NY/T 570—20023.3.2.2结果观察沙门氏菌为两端钝圆的中等大杆菌，有时近似球杆形，单独散在，着色良好，偶见菌体两端着色较深,革兰氏阴性。3.3.3分离培养3.3.3.1操作方法用铂金耳钓取病料标本，接种于TTB增菌液中做增菌培养，同时接种于普通琼脂、SS琼脂做分离培养，于 37℃恒温箱中孵育18 h～24 h。3.3.3.2培养特性观察见到下述培养特性时，符合沙门氏菌特性。3.3.3.2.1TTB增菌液生长良好，均勾混浊，管底有黏稠沉淀物。3.3.3.2.2普通琼脂正圆形、表面光滑、微隆起、闪光、半透明、边缘整齐的中等大菌落(直径 2 mm～~4 mm)。3. 3. 3. 2. 3 SS 琼脂正圆形、淡桔红色、半透明中等大菌落，产生硫化氢(H,S)的菌株，有时使菌落中心带黑色。3.3.4生化特性鉴定3.3.4.1操作方法3.3.4.1.1初筛培养用铂金耳选取上述可疑菌落，先接种于TSI培养基的斜面上，再穿刺接种于