DB34T 3053-2017白酒中非挥发性有机酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法.docx

ICS 67.040 C 53 安 徽 省 地 DB34 方 标 准 DB 34/T 3053—2017 白酒中非挥发性有机酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of non-volatile organic acids in Baijiu—high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry 文稿版次选择 2017 - 12 - 30 发布 2018 - 01 - 30 实施 安徽省质量技术监督局 发 布 I DB34/T 3053—2017 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽白酒标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位： 安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司、安徽润安信科检测科 技有限公司、安徽文王酿酒股份有限公司。 本标准主要起草人：周庆伍、李安军、刘国英、马雷、沈小梅、王银辉、刘露、汤有宏、胡心行、 丁峰、崔磊、杨恩贺。 1 DB34/T 3053—2017 白酒中非挥发性有机酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱-串联质谱法测定白酒样品中非挥发性有机酸含量的分析方法。 本标准适用于白酒中酒石酸、苹果酸、没食子酸、绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 去除待测白酒中的易挥发物质， 经高效液相色谱分离， 选择质谱检测器进行定性、定量。采用外标 法定量检测非挥发性有机酸的含量。 4 标准物质与试剂 除另有规定外，所用试剂均为色谱纯，水为符合 GB/T 6682 的实验室用一级水。 4.1 乙腈 配制色谱流动相使用。 4.2 7 种非挥发性有机酸物质标准品 酒石酸、苹果酸、没食子酸、绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸， 化合物信息见附录A，纯度均 大于 99.5％。 4.3 甲酸 配制色谱流动相使用。 4.4 0.1％甲酸溶液 准确吸取 1.00 mL 甲酸，用适量的水稀释，转移至 1000 mL 容量瓶中，用水定容，经 0.22 μm 水相滤膜抽滤待用。 4.5 0.1％甲酸-乙腈溶液 准确吸取 250 μL 甲酸加入至 250 mL 容量瓶中，使用乙腈定容，经 0.22 μm 有机相滤膜抽滤待 用。 2 DB34/T 3053—2017 4.6 有机酸混合标准储备液(1 分别称取上述有机酸标准品 为混标储备液；然后将其放置于 4.7 有机酸混合标准使用液 mg/mL) 100 mg(精确至 0.1 mg)，置于 100 mL 容量瓶中，用水定容，即作 4℃冰箱中保存，有效期 3 个月。 用水将 4.6 有机酸混合标准储备液稀释成 20 μg/mL，40 μg/mL，80 μg/mL，160 μg/mL，200 μg/mL 系列浓度的标准工作溶液。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配置 ESI 源。 5.2 电子分析天平：感量 0.1 mg。 5.3 氮吹仪。 5.4 真空抽滤装置。 5.5 微孔滤膜： 0.22 μm (水相、有机相)。 6 分析步骤 6.1 液相色谱参考条件 ——色谱柱：C18 色谱柱(2.1 x 50 mm， 1.8 μm)或具备同效其它色谱柱； ——色谱柱温为：45℃； ——流动相：A 相为(4.5)； B 相为(4.4)； ——流速为：0.25 mL/min； ——洗脱方式：梯度洗脱； ——进样体积：2 μL； ——运行时间：5 min； ——高效液相色谱梯度洗脱条件(见表 1)。 表1 高效液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流动相体积分数 /％ 梯度曲线 A B 0.0 0 100 6 0.5 20 80 6 1.0 10 90 6 2.0 30 70 6 2.5 30 70 6 3.0 0 100 6 3.5 0 100 6 5.0 0 100 6 3 DB34/T 3053—2017 6.2 质谱仪 MS/MS 的参考条件 ——离子化模式为：电喷雾离子源 ESI(-)； ——脱溶剂气温度为：500℃； ——脱溶剂气流量为：1000 L/h； ——锥孔气流量为：50 L/h； ——毛细管电压为：3.0 kV； ——采集模式：多反应监测(MRM)模式。 6.3 标准曲线的制作 在液相色谱条件 6.1 和质谱条件 6.2 下测定系列浓度的有机酸标准使用液