QB_T 5197-2017葡萄酒中12种游离氨基酸的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.160.10分类号：X62QB备案号：60688-2017中华人民共和国轻工行业标准QB/T5197—2017葡萄酒中 12种游离氨基酸的测定高效液相色谱法Determination of 12 kinds of free amino acids in wines-High performance liquidchromatography2017-11-07 发布2018-04-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布 QB/T 5197-2017前 言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，本标准由由中国轻工业联合会提出。本标准由全国食品发酵标准化中心归口。本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、宜宾市产品质量监督检验所、深圳中检联检测公司、天津科技大学、中国长城葡萄酒有限公司。本标准主要起草人：钟其顶、陈黎、陈鹏飞、杜丽平、商华、高红波、李国辉。本标准为首次发布。I QB/T5197-2017葡萄酒中12种游离氨基酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了丹磺酰氯柱前衍生高效液相色谱测定葡萄酒中12种游离氨基酸的方法。本标准适用于葡萄酒中精氨酸(Arg)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)、-氨基丁酸（Gaba）、氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、色氨酸（Trp）、苯丙氨酸(Phe)共12种游离氨基酸的测定。本标准方法的检出限（mg/L）分别为：精氨酸，0.38；丝氨酸，0.35；苏氨酸，0.48；甘氨酸，0.26；丙氨酸，0.36；脯氨酸，0.28；-氨基丁酸，0.40；缬氨酸，0.56；异亮氨酸，0.45；亮氨酸，0.40；色氨酸，0.60；苯丙氨酸，0.40。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理采用丹磺酰氯衍生剂与葡萄酒中游离氨基酸进行衍生反应，氨基酸衍生产物具有荧光特性，经色谱柱分离后，荧光检测器检测，外标法定量。4 试剂除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙腈（色谱纯）。4.2无水碳酸钠。4.3碳酸氢钠。4.4磷酸二氢钠（二水化物）。4.5石磷酸氢二钠（十二水化物）。4.6浓磷酸（85%，质量分数）。4.7甲胺盐酸盐。4.8 N,N-二甲基甲酰胺。4.9丹磺酰氯（纯度≥98%）。4.10浓盐酸。4.11氨基酸标准品（纯度≥98%）：具体名称参见附录A。盐酸溶液（0.1mol/L）：吸取0.90mL浓盐酸（4.10）至100mL容量瓶中，用水定容，混匀。4.12磷酸水溶液（10%，体积分数）：吸取10mL浓磷酸（4.6）至100mL容量瓶中，用水定容，混匀。4.13碳酸钠-碳酸氢钠溶液（0.08mol/L，pH9.5）：分别称取0.256g无水碳酸钠（4.2）和1.141g碳酸氢钠（4.3）用水溶解并定容至200mL容量瓶中，混匀。4.14丹磺酰氯溶液（6g/L）：称取0.060g丹磺酰氯（4.9），用乙（4.1）溶解并定容至10mL容量瓶中，混匀，现配现用。1 QB/T 5197— 20174.15盐酸甲胺溶液（20g/L）：称取0.2g甲胺盐酸盐（4.7），用水溶解并定容至10mL容量瓶中，混匀。4.16氨基酸标准储备液（500mg/L）：准确称取0.050g各氨基酸标准品（4.11），用0.1mol/L盐酸溶液（4.12）溶解并定容至100mL容量瓶中，混匀。0℃～4°C冰箱保存，有效期3个月，或经国家认证并授予标准物质证书的氨基酸标准物质。4.17氨基酸混合系列标准工作液：准确量取氨基酸标准储备液（4.17），用水逐级稀释，依次配制成0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、50.0mg/L的系列氨基酸混合标准工作液，现配现用。5仪器和材料5.1高效液相色谱仪：配有荧光检测器。5.2天平：感量为0.1mg和0.01g。5.3涡旋混合器。5.4恒温水浴锅。5.5有机系微孔滤膜：孔径不大于0.45μum。6分析步骤6.1样品衍生吸取0.5mL葡萄酒样品于10mL容量瓶中，用水定容，混匀。吸取1mL稀释后的葡萄酒样于带塞试管中，加入1mL碳酸钠-碳酸氢钠溶液（4.14）、1mL丹磺酰氯溶液（4.15），涡旋混匀。置于恒温水浴锅中60℃避光衍生2h，然后加入0.1mL盐酸甲胺溶液（4.16）混匀，60℃避光衍生15min。取反应完成的溶液，经0.45μum有机系滤膜过滤，滤液用于液相色谱测定。6.2标准工作液衍生分别移取1.0mL氨基酸混合系列标准工作液（4.18），置于带塞试管中