SC_T 7016.1-2012鱼类细胞系 第1部分:胖头鱥肌肉细胞系(FHM).pdf

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ICS 65.150B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.12012鱼类细胞系第1部分:胖头肌肉细胞系(FHM)Fish cell lines-Part 1 : Fathead monnow cell line (FHM)2012-12-07 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7016. 1--2012前創言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分:第1部分:胖头够肌肉细胞系(FHM);第2部分:草鱼肾细胞系(CIK);第3部分:草鱼卵巢细胞系(CO);第4部分:虹鳟性腺细胞系(RTG-2);第5部分:鲤上皮瘤细胞系(EPC);第6部分:大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);第7部分:棕细胞系(BB);1第8部分:斑点叉尾卵巢细胞系(CCO);第9部分:蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);第10部分:狗鱼性腺细胞系(PG);-第11部分:虹鳟肝细胞系(R1);第 12部分:鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第1部分。本部分按照GB/T 1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。本部分起草单位:全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人:孙喜模、张利峰、高隆英、徐立蒲、钱冬、刘琪。I SC/T 7016. 1—2012鱼类细胞系第1部分:胖头肌肉细胞系(FHM)1 范围本部分描述了胖头肌肉细胞系(fathead monnow cell line,FHM)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分鱼类病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于对胖头肌肉细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1胖头肌肉细胞系fathead monnow cell line,FHMGravell,M.R.G.Malsbergen 1965年从胖头够(Pimephales promelas)的肌肉组织细胞经原代培养、衍生的连续细胞。4 细胞的形态、大小与特性4.1形态为上皮样细胞(参见附录A)。4.2大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约为10.67um,其中,最大量细胞的峰值直径约9. 36 μm(参见附录 B)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病病原的敏感性FHM 对鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)、传染性造血器官坏死病毒(Infectious haematopoietic necrosis virus, IHNV)、病荐性出血性败血症病毒(Viral haemoprhagic septi-caemia,VHSV)、流行性造血器官坏死病毒(Epizootic haematopoietic necrosis virus,EHNV)等病毒敏感,接种后的CPE形态参见附录A。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合 GB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液1 SC/T 7016. 1--2012主要成分见C.1。5.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。5.4仪器设备主要包括:生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备;倒置显微镜;一血球计数板或电子细胞计数仪;一一细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1培养温度细胞置于生化培养箱内,在15℃~28℃下培养,其最适生长温度为25℃。6.2 培养液 pH7.2~7.6。7细胞传代和保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液在超净工作台内、无菌环境下吸弃长满单层FHM的细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加入细胞消化液,一般在50mL培养瓶中加人5mL或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL~0.2ml,加人量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的 FHM消化时间一般为1min~3min,细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液,轻轻拍打细胞培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞生长液与稀释将消化液吸弃后,在 50mL细胞培养瓶中加入10mL~15mL细胞培养液(见C.1),按每瓶5ml分成2瓶~3瓶,使细胞浓度达到1×105个/mL。分瓶后8h内,细胞贴壁并生长;18h后能长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶按培养面每平方厘米加人 0.1mL~0.2mL的细胞培养液。7.1.4细胞的传代

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