SN_T 1699-2017猪流行性腹泻检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1699—2017代替 SN/T 1699.1—2006,SN/T 1699.2--2006,SN/T 1699.3—2006猪流行性腹泻检疫技术规范Quarantine protocol for pofcine epidemic diarrhea2017-07-21 发布2018-03-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局0598233、、刮涂层查真伪。 SN/T 1699—2017前．言本标准按照GB/T1.1---2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1699.1—2006《猪流行性腹泻微量血清中和试验操作规程》、SN/T1699.2—2006《猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程》、SN/T1699.3-2006《猪流行性腹泻间接斑点酶联免疫吸附试验操作规程》。本标准与 SN/T 1699.1---2006、SN/T 1699.2—2006、SN/T 1699.3--2006 相比，主要技术变化如下：增加了猪流行性腹泻病毒分离鉴定方法；增加了反转录-聚合酶链式反应方法；增加了实时荧光反转录聚合酶链式反应方法；增加了酶联免疫吸附试验方法，取代间接斑点酶联免疫吸附试验操作规程；修改了直接免疫荧光试验操作规程，采纳NY/T544-2015《猪流行性腹泻诊断技术》中6.2“直接免疫荧光法”，并对其操作步骤进行细化描述；修改了微量血清中和试验操作规程，对推荐采用的细胞系、病毒增殖与毒价测定、对照设置等内容进行了修改和补充。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、华南农业大学、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人：陈茹、马保华、马静云、艾青、朱道中、程珏益、秦智锋、杨俊兴、杨健、刘志玲、伍绮文、罗琼、段燕喻、孙洁、林志雄、陈兵、王莹、鱼海琼。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1699.1-—2006;--SN/T 1699.2---2006;SN/T 1699.3—2006。1 SN/T 1699—2017猪流行性腹泻检疫技术规范1范围本标准规定了猪流行性腹泻的病毒分离鉴定、反转录聚合酶链式反应、实时荧光反转录聚合酶链式反应、直接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验和微量血清中和试验的实验室检疫技术规范。本标准适用于进出境猪中猪流行性腹泻的检疫、疫情监测和诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。PED:猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea)PEDV:猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus)PBS:磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline)Vero:非洲绿猴肾细胞DMEM：一种改良细胞培养液(dulbeccos modified eagle medium)CPE:致细胞病变效应（cytopathic effect）RT-PCR:反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction)ddH2O:双蒸水(double distilled water)DEPC:焦碳酸二乙酯（diethy pyrocarbonate）BSA:牛血清白蛋白(bovine serum albumin)Ct：荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数FITC:异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate)ELISA：酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay)TMB:3,3’,5,5-四甲基联苯胺(3,3,5,5-Tetramethylbenzidine)OD:光密度(optical density)TCIDso：半数组织培养感染剂量（tissue culture infective dose）4猪流行性腹泻概述猪流行性腹泻（PED)是由冠状病毒科（Coronauiridae）、冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种急性高度接触性猪肠道传染病，临床表现呈水样腹泻、呕吐、脱水、运动僵硬和哺乳仔猪高死亡率等特征。各种年龄猪均可感染，其中以1周龄内的哺乳仔猪最为易感。PEDV主要通过被感染猪的粪便或其他病毒污染物传播，自然条件下,PEDV通过口与鼻途径进人猪的体内。PED的流行无明 SN/T 1699—2017显季节性，但多在寒冷季节发生。5实验室诊断技术5.1 病毒分离鉴定5.