SNT 1827-2006进出口食品中产志贺毒素大肠杆菌检验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1827—2006进出口食品中产志贺毒素大肠杆菌检验方法Determination of shiga toxin-producing Escherichia coliin foods for import and export2006-11-10 发布2007-05-16实施中华人民共和国较发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T言本标准的附录 A、附录B均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李晓虹、蒋琴娣、韩伟、杨捷琳。本标准是首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1827—2006引言产志贺毒素大肠杆菌（Shiga Toxin-producing Escherichia coli,STEC)为食源性致病菌,STEC 细菌为需氧或兼性厌氧,革兰氏阴性,有周鞭毛,并有菌毛,不产生芽孢的产志贺毒素的大肠杆菌。STEC是世界上人类食品中毒的重要的致病因子，也是引起大规模食源性食物中毒的主要病原菌之一。STEC中有 100 余个血清型的致病性大肠杆菌可以致病,其中O157:H7是主要的血清型。可引起非出血性腹泻、出血性结肠炎（haemorrhagic colitis，HC）、溶血性尿毒综合症（haemolytic uraemic syn-drome,HUS)、血栓性血小板减少性紫癜（thrombotic throbocytopenic purpura,TTP)。而非 O157 的STEC,其主要血清型有O26、0111、0103和O145也严重威胁着人类的健康。STEC致病的特征性毒力因子是 1 型志贺毒素（stxl)和 2 型志贺毒素（stx2）,分别由 stαl 基因编码和 sta2 基因编码。其他毒力因子如 eaeA基因编码的粘附因子和 hlyA 基因编码的溶血素因子也是重要的毒力因子。因此采用多重 PCR技术对样品进行STEC的毒力基因鉴定，不仅可作特征性鉴定，而且还可对其潜在的致病性作出前瞻性判断,可快速检测出样品中 STEC。 SN/T 1827—2006进出口食品中产志贺毒素大肠杆菌检验方法范围本标准规定了进出口食品中产志贺毒素大肠杆菌的检验方法。本标准适用于食品中产志贺毒素大肠杆菌的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28食品卫生微生物学检验　染色法、培养基和试剂SN/T0330出口食品微生物学检验通则SN/T 0973　进出口肉及肉制品中肠出血性大肠杆菌O157：H7检验方法3缩略语下列缩略语适用于本标准。3.1m-n EC改良新生霉素大肠杆菌增菌肉汤。3. 2CT-SMAC头孢克-亚碲酸钾山梨醇麦康凯琼脂。3.3TSB胰化大豆陈蛋白陈肉汤。3. 4STX志贺样毒素或称为VT毒素。3.5 IMS immunomagnetic separation免疫磁珠分离。3. 6PCR polymerase chain reaction聚合酶链反应。3.7DNA deoxyribonuleic acid脱氧核糖核酸。 SN/T 1827-20063. 8dNTP deoxyribonucleoside triphosphate脱氧核苷酸三磷酸。3. 9dATP deoxyadenosine triphosphate脱氧腺苷三磷酸。3. 10dCTP deoxycytidine triphosphate脱氧胞苷三磷酸。3.11dGTP deoxyguanosine triphosphate脱氧鸟苷三磷酸。3. 12dTTP deoxythymidine triphosphate脱氧胸苷三磷酸。3.13dUTP deoxyuridine triphosphate脱氧鸟苷三磷酸。3.14UDG uracil DNA glycosylase尿嘧啶 DNA-糖基酶。3. 15Tag Thermus aquaticu水生栖热菌。3.16Tris tris(hydroxymethyl) aaminomethane三(羟甲基)氨基甲烷3. 17TE Tris. HCI. EDTA(ethylena diainetetraaceticacid盐酸三(羟甲基)氨基甲烷乙二胺四乙酸4设备和材料4.1培养箱：36℃±1℃,41℃±1℃。4.2²吸管:1 mL、5 mL和 10 mL,分刻度 0.1 mL。4.3涂布棒：直径