SN_T 3903-2014进境牛、羊包虫病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3903—2014进境牛、羊包虫病检疫技术规范Quarantine protocol for echinococcosis of entry cattle, sheep and goats2014-11-01实施2014-04-09 发布中华人民共和国发布E国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准进境牛、羊包虫病检疫技术规范SN/T 3903--2014*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张1字数 24 千字2014年12月第一版反　2014年12月第一次印刷印数11 300*书号：155066·2-27859 SN/T 3903—2014前言本标准按照GB/T 1.1-—2009给出的规则起草。本标准修改采用国际动物卫生组织（OIE)编写的《陆生动物疾病诊断手册》（2010版）中2.01.04Echinococcosis／Hydatidosis中牛羊包虫病部分的有关内容制定而成。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、青海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：吴绍强、王彩霞、赵青、林祥梅、刘建、邓俊花。1 SN/T 3903—2014进境牛、羊包虫病检疫技术规范 范围1本标准规定了进境牛、羊包虫病检疫时的形态学鉴定、组织病理学鉴定、ELISA 检测以及 PCR检测的技术规范。本标准适用于进境牛、羊等动物及其产品中包虫（即细粒棘球蝴)的检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T 1193基因检验实验室技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1过碘酸希夫反应periodic-acid-Schiff reaction;PAS糖被强氧化剂过碘酸氧化后,形成多醛。多醛再与无色的品红硫酸复合物（即希夫试剂)结合，形成紫红色产物。在结缔组织中出现PAS阳性的无细胞堆积层即为棘球坳。4 临床诊断牛羊在轻度感染及感染初期通常无明显症状，严重感染时表现被毛逆立，消瘦，发育不良。寄生肺部时有明显咳嗽,寄生在肝脏可引起消化不良等症状。但一般临床症状不明显。5实验室检测5.1 组织病理学鉴定5.1.1剖检细粒棘球主要寄生于牛或羊的肝、肺等部位，用手触诊或者剖开组织时可发现包囊。如在囊内或育囊中发现原头节即可确诊为棘球坳。如结构不清，可进一步采用过碘酸希夫反应(PAS)进行确诊。5.1.2形态学检查细粒棘球坳为包囊状构造，直径5cm～10 cm，最大可达 30 cm，囊内充满淡黄色液体，可生成内源性子囊以及原头。原头坳顶突上有两排小钩，钩的大小不同，第一排长 22 μm～45 μm,第二排长18 μm～38 μm（参见附录A)。检获的可疑包囊组织用4%甲醛固定,并采用过碘酸希夫反应进行确诊。 SN/T 3903—20145.1.3过碘酸希夫反应(PAS)主要试剂与设备.1高碘酸溶液：配制方法见附录B中B.1。.21%淀粉糖化酶溶液：配制方法见B.1。.3Schiff 溶液：配制方法见B.1。.4亚硫酸氢盐溶液：配制方法见B.1。.5Harris苏木素染液：配制方法见B.1。.6切片机。.7光学显微镜。试验步骤.1切取经过 4%甲醛固定的可疑包囊1 cm²～3 cm²，用水冲洗后，用浓度分别为 35%、50%、70%、85%、95%、100%的梯度乙醇逐步脱水，根据包囊的大小调整每一步所需的时间（1h～3h），每-步至少1h，100%乙醇需要两次。.2经50%无水乙醇十50%二甲苯至少30min后，再用二甲苯透明两次，每次至少30min。.3经50%二甲苯十50%石蜡至少30min后，再用石蜡浸泡两次，每次至少30min。.4用石蜡包埋，切片，切片厚度约4μm～6 μm，用粘片剂固定于洁净的载玻片上烘干。.5用二甲苯脱蜡10min，再用50%无水乙醇十50%二甲苯浸泡5min，然后用浓度分别为100%、95%、85%、70%、50%、35%的梯度乙醇逐步复水。每步约3 min～5 min，最后置蒸馏水中。.6试验应设立肝、肺等未感染正常组织对照：待检组织切片用高碘酸溶液处理2 min～5 min，用蒸馏水充分漂洗；正常组织切片则用1%淀粉糖化酶37℃消化1h，再用蒸馏水漂洗。.7室温，Schiff 试剂作用15 min。.8用亚硫酸氢盐溶液浸 3次，每次 2min。然后流水冲5 min，再用蒸馏水漂洗1 min。.9J