SNT 1826-2006进出口动物源食品中19-去甲睾酮残留量的测定方法 气相色谱-质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1826--2006进出口动物源食品中19-去甲辜酮残留量的测定方法气相色谱-质谱法Determination of 19-Nortestosterone residues in foodstuff ofanimal origin for import and export-GC-MS2006-11-10 发布2007-05-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪， SN/T 1826--2006前言本标准附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国上海出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：韩丽、李波、郭德华、杨景贤、杨惠琴、王敏本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1826-2006进出口动物源食品中19-去甲睾酮残留量的测定方法气相色谱-质谱法1范围本标准规定了进出口动物源食品中肝、肾和肌肉中-19-去甲睾酮残留量的测定方法。本标准适用于动物源食品中肝、肾和肌肉中.19-去甲睾酮残留量的测定。2测定方法2.1方法提要动物组织中目标化合物在缓冲液中经酶水解后用甲醇提取，正已烷去脂，提取液经C18小柱净化，衍生化反应后，用气相色谱-质谱联用仪测定，外标法定量。2.2试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。2.2.1β葡糖醛酸糖苷酶:100 UmL2.2.2冰乙酸。2.2.3乙酸钠。2.2. 4甲醇。2.2.5正已烷：优级纯。2.2.6乙醚。2.2.7氢氧化钠。2.2.8异辛烷：优级纯。2.2.9七氟丁酸酐。2.2. 101mol/L氢氧化钠溶液：溶解.40g氢氧化钠于iL水中。2. 2. 11乙酸盐缓冲溶液(0.2mo1/L,pH=5.2±0.):16.4μg,乙酸钠溶于 90QmL水中,用冰乙酸调节pH值至5.2±0.2,再用水定容到1.I2.2.1219-去甲睾酮标准品，纯度≥9g%。2.2. 1319-去甲睾酮标准溶液：准确称取适量的19-去甲睾酮标准品，用甲醇配制成浓度为100 μg/mL标准储备溶液。根据需要再用甲醇将标准溶液稀释成适用浓度的标准工作液。2.3仪器和设备2.3.1气相色谱-质谱联用仪GC-MS)2. 3.2高速匀质器。2.3.3离心机:4 000 r/min。2.3.4涡旋混合器。2.3.5旋转蒸发仪。2.3.6C18固相萃取小柱：500mg，依次用5mL甲醇和5mL水活化，备用。2.3.7氮吹仪。2.3.82 mL带螺旋帽盖的衍生化小瓶（配聚四氟乙烯内衬密封垫）。2.4测定步骤2.4.1样品的制备从所取全部动物组织样品中取出有代表性样品约1kg，充分绞碎，混匀，均分成两份，分别装入洁 SN/T 1826--2006净容器内。密封作为试样，标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。2.4.2酶解从试样中准确称取 10 g（精确到 0.01 g）于 50 mL塑料离心管中，加 10 mL 乙酸盐缓冲液（2.2.11）,均质，再加50μLβ-葡糖醛酸糖苷酶，充分混匀,混合物在37℃保温18h。2.4.3提取、净化样品酶解后加30mL甲醇,混合2min,在60℃水浴中放置15min，放人一18℃的冰箱中2h～3h。以3500r/min速度离心5min,将上清液轻轻地倒人另一50mL塑料离心管中，用10 mL正已烷萃取上清液两次，正已烷层弃去。剩余溶液倒人100mL锥型烧瓶中，在40℃水浴中旋转蒸发除去甲醇。剩余溶液全部上样到C1：固相萃取小柱，抽干，用13mL正已烷+乙醚溶液（30十70)将目标化合物洗脱并收集。洗脱液经氮气浓缩到 7mL左右，加1 mol/L的氢氧化钠1 mL，在涡旋混合器上振荡 2 min,再以2 000 r/min速度离心;将有机层转移到另一个试管中,在40℃水浴下用缓慢的氮气流吹至近干。2.4.4衍生化将上述试管中残留物用洗脱液完全转移到2mL的衍生瓶中（2.3.8），继续用氮气吹干，加100μL异辛烷和50 μL七氟丁酸酐,振荡,于80℃的恒温箱中反应 30 min,取出后冷却至室温，再用氮气流于40℃水浴中吹干，加200μL的异辛烷振荡溶解，供气相色谱-质谱分析。2.4.519-去甲睾酮标准工作溶液的制备准确吸取一定量适用浓度的19-去甲睾酮标准溶液（2.2.13）于带螺旋帽盖的衍生化小瓶中（2.3.8），用氮气流于40℃水浴中吹干，按2.4.4操作进行衍生化。2.4.6测定色谱条件1色谱柱:HP-5MS,30 m×0.25 mm(内径)X0.25 μm或相当者;a）柱温程序：80℃（保持1min），以10℃/min升至170℃，再以2℃/min升温至220℃（保持b）1 min）,再以20℃/min