NY_T 2547-2014生鲜乳中黄曲霉毒素M1筛查技术规程.pdf

ICS 67.100X 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2547—2014生鲜乳中黄曲霉毒素M筛查技术规程Technical regulation of on-site screening aflatoxin M, in fresh milk2014-03-24发布2014-06-01实施中华人民共和国农业部阝发布 NY/T 2547—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部提出并归口本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：李培武、郑楠、张奇、丁小霞、唐晓倩、张文、周海燕、李松励、王督、姜俊、张兆威- NY/T 2547—2014生鲜乳中黄曲霉毒素M,筛查技术规程1范围本标准规定了生鲜乳中黄曲霉毒素M筛查技术规程。本标准适用于生鲜乳中黄曲霉毒素M，的时间分辨免疫层析法的筛查。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件.其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂。3.1水，按照GB/T6682中的要求，二级。3.2甲醇(CH,OH)。3.3销标记黄曲霉毒素M，抗体溶液：黄曲霉毒素M，抗体纯度80%以上，与其他黄曲霉毒素交叉反应率小于10%，抗体亲和力常数不低于1.00×10°/mol。3.41000ng/ml.黄曲霉毒素M，标准溶液。3.5100ng/ml.黄曲霉毒素M,标准储备液：准确吸取黄曲霉毒素标准溶液（3.4)1.0ml.于10ml容量瓶中，甲醇定容。4℃保存（有效期：90d）.备用。警告：由于黄曲霉毒素毒性很强.试验人员应注意自我保护。操作时.应避免吸人、接触黄曲霉毒素标准溶液。配制标准溶液应在通风橱内进行.工作时应戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触黄曲霉毒素的容器.需浸泡于10%次氯酸钠溶液中12h.然后清洗。同时.为了降低接触黄曲霉毒素的机会.本标准鼓励直接购买并使用黄曲霉毒素的有证标准储备液。4仪器设备与材料4.1时间分辨荧光检测仪：激发波长为（365±5）nm.检测波长为（615±5）nm。4.2黄曲霉毒素M，免疫层析装置（图1）：固定有AFM，-BSA偶联物.检测灵敏度不低于0.1ug/kg用于样品中黄曲霉毒素M，与铕标记抗体预反应后再与黄曲霉毒素一BSA偶联物反应的载体；不得出现假阴性，假阳性率低于15%。1 NY/T2547—2014(a)正视图(h)侧视图说明：一样品垫；1—底板；-5——质控线；2——吸水垫；一检测线。3-—硝酸纤维素膜；5-图1黄曲霉毒素M，免疫层析装置示意图4.2.1AFM,-BSA偶联率为(1：5)～(1：20)(BSA：AFM)。4.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片等。4.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于75s。4.2.4吸水纸。4.2.5底板。4.2.6连接胶带。4.3恒温装置：（37.0±2.0)℃。4.4漩涡混合器。4.5微量移液器：20μl~200μL100μl~1000μl。4.6分析天平：感量为0.01g。4.7水浴锅。4.8：10ml移液管。4.950ml.烧杯。5抽样5.1抽样人员应熟知抽样程序和方法。5.2抽样人员应准备相应的工具和包装容器。抽样工具和包装容器应清洁、干燥，不会对样品造成污染。5.3样品应从足够量的同批产品中随机抽取。若用大桶或奶罐盛装的.应充分混匀后再采样2 NY/T2547—20145.4通常抽样量不低于300ml，分样成3份.其中一份做检验样，一份做复检样.一份做备用样品，分别盛放3个容器中。6黄曲霉毒素筛查6.1在室温条件下，取150.0μl.销标记的黄曲霉毒素M，抗体溶液（3.3）于1.5mL样品瓶.备用。6.2用分析天平（4.6)准确称取10.0g样品至50ml.烧杯中（精确至0.1g），混匀备用6.3取300.0μl样品（6.2).垂直滴加于样品瓶（6.1)内.漩涡混合5s。取出黄曲霉毒素M，免疫层析装置（4.2）.按箭头方向插人加样后的样品瓶中.将样品瓶置于恒温装置中，37℃反应6min。6.4取出黄曲霉毒素M，免疫层析装置（4.2).上机(4.1)检测。6.5取阴性生鲜乳样品，将黄曲霉毒素M，标准储备溶液（3.5）配制为0.1ng/ml、0.2ng/ml.、0.3ng/ml、0.5ng/ml.、1.0ng/ml.、2.0ng/ml.的系列标准工作液.由低到高浓度进行（6.3、6.4)检测.根据检测线T信号值与质控线C信号值的比值（T/C)和标准溶液浓度的自然对数值（Inc）建立标准曲线。