SNT 2327-2009进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2327—2009进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法Determination of canthaxanthin and astaxanthinin foods of animal origin food for import and export2009-07-07发布2010-01-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2327--2009前言本标准附录 A、附录 B 和附录 C均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本标准主要起草人：余孔捷、钱疆、刘正才、杨方、黄杰、李耀平、李捷。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2327—2009进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的检测方法1 范围本标准规定了进出口动物源性食品中角黄素、虾青素的高效液相色谱检测与液相色谱-质谱/质谱确证法。本标准适用于黄鱼、鳗鱼、鸡肉、鸡蛋、鸭肝、猪肾和牛奶中角黄素、虾青素的测定与确证。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样用乙腈提取，正已烷脱脂、浓缩后，高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。如有必要可用液相色谱-质谱/质谱法确证。4试剂和材料所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1　乙腈：色谱纯。4.2　正已烷：色谱纯。4.3正丙醇。4.4 甲酸。4.52,6-二叔丁基对甲酚(BHT):化学纯。4.6无水硫酸钠：650℃灼烧4h,贮于干燥器内，冷却后备用。4.7 乙酸铵。4.8乙腈提取剂:0.25g BHT溶解于 500 mL 乙腈。4.9BHT-乙腈溶液:5g BHT溶解于 500 mL 乙腈。4.10乙酸铵溶液(5mmol/L,含0.2%甲酸）:称取 0.38g乙酸铵，用水溶解稀释后,加2.0mL甲酸，加水至 1.0 L。4.11角黄素标准品：canthaxanthin,CAS:514-78-3，纯度大于等于 90%，于4℃避光贮存。4.12虾青素标准品：astaxanthin,CAS:472-61-7,纯度大于等于 90%，于一18℃避光贮存。4.13标准储备液：分别准确称取适量（相当于5.00mg纯品，精确至0.01mg)角黄素、虾青素标准品，分别加人BHT-乙腈溶液(4.9)溶解，定容于200mL棕色容量瓶，配制成浓度为25.0μg/mL的标准储备液。充氮气置一18℃避光保存，可使用两周。4.14混合标准工作液：分别准确移取摇匀的角黄素、虾青素标准储备液，混合，用乙腈准确稀释成适宜浓度，即配即用。1 SN/T 2327-20095仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列(DAD)或紫外-可见(UV-Vis)检测器。5.2液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾(ESI)离子源。5.3分析天平：感量0.01mg,0.01g。5.4旋涡混合器。5.5超声提取器。5.67离心机:5 000 r/min。5.7旋转蒸发器。5.8微孔滤膜0.22μm,有机系。6　试样制备和保存6.1黄鱼、鳗鱼、鸡肉、鸭肝、猪肾约r500g，用高速组织捣碎机充分捣碎、混匀。从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分6.2 鸡蛋从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500-g（生蛋应煮熟冷却后剥壳），用高速组织捣碎机充分捣碎、混匀。6.3牛奶从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分混匀，置于合适洁净容器。制样操作过程中应防止样品受到污染或发生角黄素、虾青素含量的变化，制样温度不应高于30℃，制样后应立即测定。需存放的试样应密封于洁净容器、避光于一18℃以下冷冻存放。7＇测定步骤7.1提取与净化称取试样约5g(精确至0.01g于50mL离心管中，加人30L乙腈提取剂（4.8)及10g无水硫酸钠（4.6)后，涡旋混合1min，在35%以下水浴超莆提取1dmin，再以3009r/min离心5min。将上清液移人预置有20mL正已烷的125mll分液漏斗中，振摇0/5min后，静置分层；收集下层乙腈相，正已烷相留在分液漏斗，待本试样后续脱脂重复使用。按上述步骤对离心管中的残留物每次用20ml.乙睛提取剂再重复提取两次，所得提取液用上述正已烷相依次脱脂。合并三次脱脂后所收集的乙腈相,加人5m.正丙醇，于40℃以下旋转蒸发浓缩至近干，用乙腈溶解并定容至5.0mL,0.20 μm-滤膜