SNT 1750-2006动物源性食品中抗生素类药物残留量检测方法 微生物抑制法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1750—2006动物源性食品中抗生素类药物残留检测方法微生物抑制法Determination of antibiotics residuesin animal derived food-MIA method2006-01-26 发布2006-08-26 实施安中华人民共和国因 聚15盘动发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1750-2006前言本标准参照了日本厚生省生活卫生局1996年版的《食品卫生检查指针》第6章*动物用医药品、饲料添加物”。本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：黄晓蓉、李寿崧、郑晶、杨方、陈彬、罗茂凰。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1750—2006动物源性食品中抗生素类药物残留检测方法微生物抑制法1 范围本标准规定了动物源性食品中β内酰胺类、四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类药物残留检测的试样制备、保存和微生物抑制检测方法。本标准适用于肉类、蛋、鱼和虾中的抗生素残留筛选检测，阳性结果须用其他方法进行确证。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样制备和保存3.1试样制备肉、鱼和虾：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放人高速组织捣碎机均质，充分混勾，用四分法缩分不少于500g试样。装人清洁容器内，并标明标记。蛋：从原始样品中，随机分出-一半（不少于500g），鲜蛋需去壳。将蛋黄和蛋白于混合器中充分混勾，装人清洁容器内，作为试样，并标明标记。制样操作过程中必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3.2试样保存肉、鱼、虾和蛋：试样于一18℃以下保存。4　测定方法4.1方法提要试样经缓冲液提取、温育和离心后，取上清液进行测定。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有抗生素。4.2设备和材料4.2.1恒温箱：30℃±1℃,水平隔层。4.2.2 离心机。4.2.3高速组织捣碎机。4.2.41恒温水浴锅。4.2.5涡旋振荡器。4.2.6显微镜:10×～100×。4.2.7游标卡尺：测量范围0mm～200mm，精度0.02mm或抑制圈测量仪。4.2.8灭菌平Ⅲ：直径90 mm,底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平Ⅲ。4.2.9[圆形滤纸片：直径 10o mm,厚 1.1 mm。日本 Toyo Roshi Kaisha,Ltd.产品，或相当者。4.2.10克氏瓶。1 SN/T 1750—20064.2.11 可调移液器:10 μL～~100 μL,100 μL～1 000 μL。4.3菌种和培养基4.3.1菌种4.3. 1. 1藤黄微球菌 Micrococcus luteus ATCC934l。枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis ATCC6633。4.3. 1.24.3. 1.3蜡样芽胞杆菌蕈状变种 Bacillus cereus var. mycoides ATCC11778。4.3.2 培养基保存及传代用细菌养基：见第A.I章。增菌用液体培养基：见第A.2章。增菌用固体培养基：见第A.3章。检定用培养基：抗生素培养基5号（AM5）见第A.4章，抗生素培养基8号（AM8）见*第A.5章。4.4试剂本方法所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水或去离子水，试验用水应符合GB/T 6682的规定。4.4.1缓冲液柠酸-丙酮缓冲液~a）0.2 mol/L.柠檬酸溶液：称取柠檬酸(C.H.O,)4.2.g,用无菌蒸馏水溶解并定容至100 mL。b）0.5mol/L氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾（KOH)2.8g，用无菌蒸馏水溶解并定容至100mL。c）混合液：0.2mol/L柠檬酸溶液和0.5mol/L氢氧化钾溶液等量混合。d）柠檬酸-丙酮缓冲液：按混合液+丙酮+蒸馏水35+.35+30比例制备。pH4.5磷酸盐缓冲液：称取13.6g磷酸二氢钾(KHzPO4)用蒸馏水溶解并定容至1000mL,121℃高压灭菌 15 min。pH6.0磷酸盐缓冲液：称取8.0g磷酸二氢钾（KHzPO.)及2.0g磷酸氢二钾（KzHPO），用蒸馏水溶解并定容至1000mL，121℃高压灭菌15min。pH8.0磷酸盐缓冲液：称取0.523g磷酸二氢钾（KH,PO.）及16.73g磷酸氢二钾（K,HPO.）