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dna疫苗在寄生虫病中的应用 蠕虫是一种严重的细菌疾病，严重危害人类健康。在过去几十年中，病虫害的预防和治疗取得了显著成效，但仍然是世界上的严重公共卫生问题。一些寄生虫病如疟疾,由于虫株变异及抗药性的产生,大大增加了防治难度。因此,寄生虫病疫苗研究越来越受到重视。虽然早期的全虫疫苗、多肽疫苗、基因工程蛋白疫苗等寄生虫病疫苗被广泛研究,但由于各种原因其效果不能令人满意。随着免疫学和分子生物学技术的发展,DNA疫苗的出现为寄生虫病疫苗研究提供了新的希望。DNA疫苗是继灭活疫苗、减毒疫苗、基因工程重组亚单位疫苗之后的“第三代”疫苗。DNA疫苗又称核酸疫苗,即把外源基因克隆到真核质粒表达载体上,然后将重组的质粒DNA通过肌肉注射或基因枪等方法注射到动物体内,使外源基因在活体内表达,诱导宿主细胞产生对该抗原蛋白的体液免疫和细胞免疫反应。由于DNA疫苗可诱导机体产生全面的免疫应答,并且对不同亚型的病原体具有交叉防御作用,同时又具有安全、可靠和生产方便等优点,因而在抗微生物感染、抗肿瘤、抗寄生虫免疫等领域受到高度重视。 1 t-ld型耐药反应 目前对DNA疫苗的免疫作用机理认识主要还限于理论推测,一般认为DNA疫苗可刺激机体全身性的免疫应答,特别是特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答反应,该反应的作用机制与病毒感染细胞的识别和破坏机制相似。DNA疫苗能进入宿主细胞的细胞核中转录为信使RNA,再在细胞浆中翻译成蛋白质,诱导CTL免疫反应,辅助T细胞反应和体液免疫,其具体作用机理尚未完全阐明,仍有很多问题有待深入研究。 2 表位dna疫苗 DNA疫苗由保护性抗原编码基因装载入真核表达载体而构成。合理地设计选择装载入真核表达质粒的保护性抗原编码基因是获得有效DNA疫苗的关键。保护性抗原编码基因可以是单个和多个保护性抗原编码基因,甚至可以是人工设计的包含有编码保护性抗原表位的核苷酸序列。发展有希望的寄生虫病DNA疫苗最大的挑战是选择有疫苗潜力的候选抗原。但因为寄生虫有较复杂的生活史,在宿主体内存在不同的生活史阶段,不同生活史阶段的寄生虫所表达的抗原存在差异,抗原具有多态性和变异性。所以,仅根据寄生虫的某一生活史时期抗原设计的疫苗可能对其他生活史时期的寄生虫无作用。因此,近年来逐渐提出多期复合疫苗的策略,即在一个疫苗中包含多个不同时期的疫苗候选分子,能针对不同生活史时期的寄生虫发挥作用,以增强寄生虫病疫苗的保护效果。目前,该策略已经在血吸虫病疫苗等重要寄生虫病疫苗研究中得以应用,并取得了良好的结果。但由于该策略是直接将相应的疫苗候选分子进行复合,而每个完整的疫苗候选分子序列都比较大,往往构建的疫苗仅能包含2~3个疫苗候选分子,构建包含更多疫苗候选分子的疫苗则十分困难,在一定程度上限制了此类疫苗的发展。 随着“表位生物学”概念的提出,许多蛋白抗原表位相继得到鉴定,表位DNA疫苗愈来愈受到人们广泛重视,并呈现出极大的发展空间。表位DNA疫苗是将合成的含有疫苗候选分子表位DNA序列装载入相应真核表达载体而构建的一类新型DNA疫苗。与常规DNA疫苗相比,表位DNA疫苗可以在同一载体中表达抗同一病原的多种抗原表位,诱导多重免疫保护性反应,或在同一载体中表达抗多种病原的抗原表位,避免了将多个抗原基因同时克隆到同一载体的困难,以及可能由此引起的转录干扰问题,具有安全、无毒、稳定,可以直接刺激机体产生特异性免疫反应,不会引起自身免疫反应或免疫抑制等优点。其次,表位肽疫苗可对抗原表位进行精确定位,可对T、B细胞抗原表位进行不同组合,制成针对多种病原体的疫苗。选用微生物中无突变的小片段作合成肽疫苗,可归避病原体因自身快速基因突变所形成的免疫逃避作用。由于表位一般只有几个到20个氨基酸残基不等,其免疫原性较弱,不能有效地激发细胞免疫或体液免疫,同时容易被蛋白酶降解。为使其有效发挥作用,就需要对表位疫苗结构进行合理设计,对多肽进行修饰,使用合适的佐剂,改善其免疫原性及稳定性,提高抗原呈递效果。目前,表位DNA疫苗策略已经应用于疟疾、弓形虫病、血吸虫病等多种寄生虫病疫苗研究,显示了广阔的前景。 另外,随着生物信息学等学科的发展,密码子优化设计为进一步研究有效的DNA疫苗提供了新的思路。在不改变氨基酸序列的情况下,通过DNA定点突变或人工合成全长基因将野生型基因中低频密码子更换为宿主使用频率最高的密码子,使其能在宿主体内高效表达,诱导宿主产生更强的特异性免疫应答,从而提高疫苗的保护率,减少虫负荷,减轻病情,减少疾病传播。在血吸虫病、疟疾等寄生虫病DNA疫苗的研究中均得到了很好的应用。 3 疫苗及其他免疫部分的作用 新型疫苗的发展不仅依赖于其种类和设计策略的发展,还要求佐剂的发展创新。佐剂作为疫苗不可或缺的成分,对于疫苗产生有效的免疫应答,发挥着至关重要的作用。从最初的铝盐佐