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3种常见菊花中木草素含量测定 菊花是菊花的干燥花序。主要产于浙江、安徽、河南、山东、四川等地。根据场地和加工方法，可分为滁州菊、直线菊、杭州菊和公菊。《神农本草经》将其列为上品,称“久服利气血,轻身耐老延年”。菊花味辛、甘、苦,性微寒,归肺、肝二经,甘凉益阴,苦寒泄热;具有疏风、清热、明目,解毒的功效,临床用于治疗高血压和冠心病。菊花是卫生部公布的药食两用植物,市场上有多种菊花供选择。现代药理学研究表明,黄酮类化合物木樨草素及其苷是菊花的有效成分之一,具有降低胆固醇、抗炎、抗病毒、抗肿瘤及扩张血管等作用。本实验采用HPLC法比较测定市场3种常见菊花杭菊、贡菊和毫菊中木樨草素的含量,为市售菊花的质量控制及优质菊花的选用提供科学依据。 1 仪器和试剂盒 1.1 ers-2645高效液相色谱仪 DL-720B智能超声波清洗器(上海之信仪器有限公司); Waters-2695高效液相色谱仪(美国Waters公司);2996型PDA检测器(美国Waters公司);色谱柱:Diamosil,C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)(迪马公司)。 1.2 材料、试剂和仪器 木樨草素对照品购自SIGMA公司(含量99.8%);杭菊(杭州桐乡,批、贡菊(安徽黄山,批和毫菊(山东,批;(上海石梁茶叶有限公司,55 ℃烘干过夜,粉碎,备用),经上海中医药大学药学院李医明教授鉴定为菊花Chrysanthemum morifolium Ramat。甲醇为色谱纯(国药集团化学试剂有限公司);水为超纯水。 2 方法和结果 2.1 水色度与检测波长 甲醇-水(50∶50)30 min内匀速变化到甲醇-水(80∶20),梯度洗脱;流速:1 mL/min;检测波长:350 nm;柱温:30 ℃。 2.2 对照溶液的制备 精密称取木樨草素对照品11.20 mg,置100 mL棕色量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。 2.3 提取母液、制备碳液、膜的制备 精确称取菊花样品粉末1.0 g,置50 mL具塞三角瓶中,加甲醇25 mL,超声提取15 min,滤过,重复超声提取3次,合并滤液,减压回收大部分溶剂,把母液定量转移至10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45 μm的微孔滤膜滤过,取续滤液备用。 2.4 系统适应性测试 对照品溶液及供试样品溶按上述色谱条件下分别进样10 μL。结果表明,木樨草素色谱峰与其他杂质峰达到了基线分离,见图1。 2.5 积积分回归分析 取对照品溶液,精确进样2、5、8、10、15、20 μL。以峰面积积分值(Y)对进样量X(μg)进行回归分析,木樨草素回归方程为:Y=2.65×106X+2.62×106,r=0.999 9。结果表明,木樨草素在0.224～2.24 μg范围线性关系良好。 2.6 仪器精密度试验 精密吸取木樨草素对照品溶液,分别稀释2倍和10倍,与原对照品溶液组成高中低3个浓度,各重复进样3次,每次10 μL,同上法测定,RSD分别为0.41%、1.05%、1.25%,表明本仪器精密度良好。 2.7 重复性试验 精密称取同一批号毫菊样品6份,按供试品溶液制备方法制得6份供试液,按上述色谱条件分别测定,木樨草素平均含量为0.069%,RSD=1.3%(n= 6),结果表明本试验方法重复性良好。 2.8 木草素的稳定性 取同一批号的毫菊、杭菊和贡菊供试品溶液各1份,室温下分别放置0、4、8、12、24、48 h后,按上述色谱条件,均进样10 μL,测得3种菊花中木樨草素平均峰面积的RSD分别为2.45%、1.96%和1.57%,表明供试品溶液中的木樨草素在48 h内稳定性较好。 2.9 加样回收率试验 精密称取已知木樨草素含量的毫菊样品木樨草素平均含量0.069%) 1 g,再分别精密加入一定量的对照品,按上述供试样品溶液的配制方法处理,制得低、中、高三种浓度的供试样品溶液,按上述色谱条件测定其含量,计算回收率,结果见表1。 2.10 重量测定 取3种供试品溶液10 μL进样,依上述色谱条件测定其含量,结果见表2。 3 约成本,减少污染 本研究采用的木樨草素含量测定方法,与先前发表的方法相比,流动相简单,可节约成本,减少污染。由于采用梯度洗脱,分离效果好,简化了样品的预处理步骤,使测定方法更加快捷简便。 3种菊花中木樨草素含量的测定结果显示,毫菊中含量最高,如从预防癌症和心血管病的角度出发,在选择食用菊花品种时应更多考虑毫菊。