gepsin对肝癌smmc-7721细胞分化和增殖的影响.docxVIP

gepsin对肝癌smmc-7721细胞分化和增殖的影响 根据中国卫生部的统计数据，2004年至2005年，中国的癌症年死亡率约为26.06万人，是癌症的第二周。我国原发性肝癌90%以上为肝细胞肝癌(HCC)。目前临床常用的治疗方法为手术、化疗及微创治疗等,但有许多患者因体质虚弱和病期较晚,无法接受上述治疗,因此寻求有效而又低毒性的药物用于治疗肝癌有重要的临床意义。守宫又称壁虎、天龙等,为壁虎科动物多疣壁虎(Gekko swinhonis Guenther)的干燥全体。笔者已成功地分离提取出了守宫中的抗癌化合物守宫硫酸多糖(Gepsin),来源于守宫的水煮醇沉物。本研究旨在观察由守宫中提取的Gepsin对肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖和分化的影响。 1 实验分组与检测 肝癌细胞系SMMC-7721(天津医科大学附属肿瘤医院免疫室);人转化生长因子(TGF)-β1酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(晶美生物工程有限公司Human FHK0029 TGF-β1);人血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司);苏拉明(Suramin,Sigma);常温离心机(Heraeus);低温高速离心机(Heraeus sepatech);酶标仪(Labsystem Multiscann MS);照相设备(Bio RAD和Polaroid)。 SMMC-7721细胞以1×104/m L密度接种于24孔板中,接种后24 h加药培养,分设Gepsin高剂量组(Gepsin 100 mg/L)、Gepsin低剂量组(Gepsin 10 mg/L)与阴性对照组(加等体积1640+10%FBS培养液)共3组,每组5孔。加药后30 min,24、48、72、96、120、144 h分别收集细胞,利用台盼兰染色,光学正置显微镜下计数死细胞与活细胞,做生长曲线,并计算活细胞率,活细胞率(%)=未着色细胞数/细胞总数×100%。 将已进入对数生长期的生长旺盛的SMMC-7721细胞消化后,离心,显微镜下计数,以1×104/m L密度接种于24孔板中,共分3组,即Gepsin高剂量组、Gepsin低剂量组与对照组;每组5孔,接种后24 h加药,加药培养7 d后收集上清。以联合放免法测定AFP,溴钾酚绿法测定ALB。 于24孔板中接种SMMC-7721细胞,共分3组,即Gepsin高剂量组、Gepsin低剂量组与对照组(剂量同前),光学显微镜下观察细胞形态改变。 镜下观察培养瓶内的SMMC-7721细胞生长旺盛,进入对数生长期后,将细胞消化、稀释、计数,并以5×104/m L的浓度将细胞接种入6孔板中,共分5组,即Gepsin高剂量组、Gepsin低剂量组、对照组,Suramin低剂量组(0.25 mg/L)和Suramin高剂量组(2.5 mg/L),每组5孔,加药培养4 d后收集上清,上清液中TGF-β1、VEGF的水平以ELISA法检测。 应用SPSS 13.0软件统计分析,计量资料采用ue0af±s表示,各组均数间的比较采用方差分析,进一步比较采用LSD检验;重复测量计量资料采用重复测量方差分析。P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 各组患者血清p时,2组间关联显著性试验 不同时间之间细胞增殖的差异有统计学意义,不同分组间差异有统计学意义,时间与分组之间存在交互效应(均P0.001),见表1。72 h时,低剂量组、高剂量组与对照组相比差异均有统计学意义;120、144 h时3组间两两比较差异均有统计学意义,见表2。生长曲线显示Gepsin对SMMC-7721细胞增殖有抑制作用,Gepsin高剂量组和Gepsin低剂量组的SMMC-7721细胞增殖明显受到了抑制。 2.2 细胞活率测定 对照组、Gepsin高剂量组和Gepsin低剂量组的细胞活率采用重复测量的方差分析进行比较,F时间=1.418,F交互=1.035,F分组=1.327,差异无统计学意义(均P0.05),且细胞活率较高,均在90%以上,见图1。 2.3 两组统计学意义 Gepsin低剂量组、Gepsin高剂量组ALB均高于对照组,差异有统计学意义。Gepsin低剂量组、Gepsin高剂量组AFP低于对照组,高剂量组的分泌量低于低剂量组,差异均有统计学意义,见表3。 2.4 gepsin对smmc-7721细胞增殖的影响 对照组SMMC-7721光镜下正常形态为圆形,加入Gepsin后细胞的形态发生明显变化,变为纺锤形。对照组的SMMC-7721细胞增殖活跃,排列紧密;加药后细胞分散排列,变化明显。 2.5 两组大鼠血清自适应高剂量gepsin、vegf的比较 (1)TGF-β1:对照组低于Gepsin高剂量组,差异有统计学意义(P0.01),Gep