NY_T 3179-2018甘蔗脱毒种苗检测技术规范.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3179—2018甘蔗脱毒种苗检测技术规范Technical specification for the certification of sugarcane pathogen-free planting stock2018-06-01实施2018-03-15发布中华人民共和国农业部-5发布 NY/T3179—2018前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国农作物种子标准化技术委员会归口。本标准起草单位：福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室/国家甘蔗工程技术研究中心、全国农业技术推广中心、中国热带农业科学院热带生物技术研究所。本标准主要起草人：许莉萍、阙友雄、方晓东、周泽宇、张树珍、苏亚春、陈常兵、高世武、杨本鹏、郭晋隆、吴期滨、王恒波。I NY/T 3179—2018甘蔗脱毒种苗检测技术规范1范围本标准规定了甘蔗脱毒种苗等的术语和定义、检测对象、抽样、检测方法和检测结果判定本标准适用于甘蔗宿根矮化病菌、甘蔗花叶病毒、高粱花叶病毒、甘蔗条纹花叶病毒和甘蔗黄叶病毒的检测以及甘蔗脱毒种苗的抽样和检定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本文件。NY/T2679甘蔗病原菌检测规程宿根矮化病菌环介导等温扩增检测法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1脱毒种苗pathogen-freeplanting stock经腋芽、茎尖或其他等甘蔗材料培养、繁殖或蔗茎温水处理而获得的符合相关质量要求的蔗苗（包括瓶苗、袋苗、袋栽苗、杯苗、穴盘苗、无琼脂苗或裸根苗等）或种茎（包括原种、基础种和生产用种以及经温水处理等途径获得的各类种苗）。3. 2原种primaryseed在甘蔗种苗脱毒体系中，经对检测对象进行检测合格的组培苗；或由该组培苗种植田间并经6个月～9个月生长采收后的种茎，要求30条主茎平均有效节不超过16节。3. 3基础种secondaryseed以原种为种苗，种植田间并经6个月～9个月生长采收后的种茎，要求30条主茎平均有效节不超过16节。3. 4生产用种commercial seed以基础种为种苗.种植田间并经6个月～9个月生长采收后的种茎，要求30条主茎平均有效节不超过16节。4检测对象4.1甘蔗宿根矮化病菌（Leifsoniaaylisubsp.zyli，Lxx）。4.2甘煎花叶病毒（Sugarcanemosaicvirus,SCMV)。4.3高粱花叶病毒（Sorghummosaicvirus，SrMV）。4.4甘蔗条纹花叶病毒（Sugarcanestreakmosaicvirus，SCSMV)。4.5甘蔗黄叶病毒（Sugarcaneyellow leaf virus，SCYLV)。1 NY/T3179—20185抽样5.1抽样方法按照“五点取样法”进行，示意图见图1。各点取样数量一致，单行连续取样，不同甘蔗品种或不同类型（如原种各种形式的小苗、田间繁殖的原种种茎等）的种苗均需独立抽样。图1五点取样法5.2抽样数量危害性病害甘蔗黑穗病的发生率根据表型调查来确定，无论面积大小，每点调查100株，5个取样点共调查500株。各类蔗苗（如瓶苗、袋装苗、袋栽苗、杯苗、穴盘苗、无琼脂苗或裸根苗等）以瓶、袋、株为单位，其中瓶苗以瓶为单位，袋装苗以袋为单位，袋栽苗、杯苗、穴盘苗、无琼脂苗或裸根苗以株为单位；田间种植的种苗以公顷（hm²）为单位，各类种苗目标病原检测的抽样数量见表1。表1不同类型种苗的抽样数量种苗类型种苗数量抽样数量，瓶/株15≤1000瓶/株251001瓶/株～5000瓶/株燕苗505001瓶/株～20000瓶/株20000瓶/株7515≤1 hm?251. 1 hm²~2. 0 hm²田间种植苗2. 1 hm²~4. 0 hm²50754.0 hm²6检测方法6.1环介导等温扩增(LAMP)用于检测甘蔗样品中甘蔗宿根矮化病菌，见附录A。6.2聚合酶链式反应(PCR)用于检测甘蔗宿根矮化病菌，见附录B6.3逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)用干检测甘蘑花叶病毒、高粱花叶病毒、甘蘑条纹花叶病毒和甘蘑黄叶病毒，见附录C7检测结果判定7.1实验有效判定所有检测只有在阳性对照、阴性对照和空白对照的检测结果均正常时，才能对待检样品的检测结果进行判定。7.2样品检测结果判定甘蔗宿根矮化病菌的检测结果根据附录A或附录B判定，如采用2种检测方法且检测结果不一致2 NY/T3179—2018时，则以阳性结果为准；甘蔗花叶病毒、高粱花叶病毒、甘蔗条纹花叶病毒和甘蔗黄叶病毒的检测结果根据附录C判定。