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细胞工程
一、植物细胞工程
理论基础
细胞全能性:细胞经分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各
种细胞的潜能。
植物细胞具有全能性的原因:一般生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全
套遗传信息,即都有发育成完整个体所必需的全部遗传信息。
①生物体内,细胞没有表现出全能性,而是分化成为不同的组织和器官,这是
基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果。
②植物细胞全能性表达的条件: 植物细胞一旦成为离体状态,在一定的营养条
件和植物激素(细胞分裂素和生长素)的诱导下,细胞就能表现出全能性。
(一)、植物组织培养技术(无性繁殖)
1、原理:植物细胞的全能性
2、概念:在无菌和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞、培养在
培养基上,并给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成
整的植株。
3、过程:
4 、用途:
(1)微型快速繁殖:保持优良性状(无性繁殖,有丝分裂),不受季节限制
(室内生产),适合自动化管理,有利于进行工厂化生产
(2 )作物脱毒(植物分生区—无毒或者少毒,如茎尖),脱毒作物产量高,品
质好;
(3 )人工种子(胚状体+人工薄膜);
(4 )单倍体育种:花药离体培养→单倍体→秋水仙素处理使染色体数目加倍→
稳定遗传植物
①后代往往都是纯合子,能稳定遗传;②明显缩短育种年限
(5 )突变体利用:植物组织培养过程中,细胞处于分生状态,易受影响产生突
变,需筛选
(6 )细胞产物的工厂化生产——愈伤组织生产代谢产品
(二)、植物体细胞杂交技术
1、定义:不同种植物体细胞融合形成杂种细胞,并培育成新植物体(植物体细
胞不能直接杂交)
2、理论基础:细胞的全能性和细胞膜的流动性
3、过程:
融合
①方法:
物理法包括离心、振动、电激等。
化学法一般用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂融合,高 Ca2+—高 pH 融合法。
②结果:三种(A—A 、A—B、B—B),筛选出杂种细胞 A—B
去壁
由于植物细胞壁由纤维素和果胶构成,故用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁
4 、培养杂种细胞:进行植物组织培养
5、杂交终点:得到杂种植物
6:杂种植物特征:含有两种植物的遗传物质,所以具备两种植物的遗传特征
7、意义:打破生殖隔离,克服远缘杂交不亲和障碍
8 :遗传:如果两种植物都是可育的,则杂种植物也是可育
(三)、植物组织培养与植物体细胞杂交的关系
植物组织培养是植物体细胞杂交的基础,植物体细胞杂交所用的技术更复杂。
植物体细胞杂交除脱分化、再分化之外,还要用酶解法去除细胞壁,用一定的
方法诱导细胞融合。
二、动物细胞工程
(一)、动物细胞培养(其他动物细胞工程技术的基础)
1、概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织(常选用动物胚胎或
幼龄动物的器官或组织,分裂旺盛),将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培
养基中,让这些细胞生长和繁殖。
2、细胞贴壁:将细胞悬液放入培养瓶内,置于适宜环境中培养,悬液中分散的
细胞很快就贴附在瓶壁上。
3、细胞的接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分
裂增殖的现象。
4 、原代培养:通常指分瓶之前的细胞培养,即动物组织经处理后的初次培养。
5、传代培养:分瓶之后的细胞培养。
6、原理:细胞增殖,有丝分裂
7、条件:
①无菌、无毒的环境:添加一定量的抗生素;应定期更换培养液,防止代谢产
物积累
②营养:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、
血浆等
③温度:哺乳动物多是 36.5℃±0.5 ℃;pH:7.2~7.4 。
④气体环境:含 95%空气加 5%CO2 的混合气体,CO2 的作用是维持培养液的
pH。
8、过程:
9、应用:制备病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体,检测有毒物质(根据变异细胞
占全部培养细胞的比例来判断该物质的毒性)、培养医学研究的各种细胞,基因
工程中动物细胞做受体时。
(二)、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1、种类:胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难)。全能性不
同
2、受体:去核卵(母)细胞,细胞比较大,容易操作;卵(母)细胞细胞质多,营
养丰富。
3、原理:只体现了细胞核的全能性,即动物细胞核中具有该种动物全套的遗传
信息。
4 、结果:发育成动物个体
5、繁殖:无性繁殖
6、涉及技术:动物细胞培养技术、动物细胞融合技术、核移植技术(核心)、
胚胎移植技术等。
7、过程:供体一般不选择生殖细胞,遗传物
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